Efeito do tratamento com drogas anti-inflamatórias e/ou imunossupressoras sobre a função renal e na expressão gênica de fatores pró-fibróticos e citoprotetores em modelos experimentais de falência.

Damião, Marcio Jose

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Autor(es):	Damião, Marcio Jose
Orientador:	Roberto Kenji Nakamura Cuman
Título:	Efeito do tratamento com drogas anti-inflamatórias e/ou imunossupressoras sobre a função renal e na expressão gênica de fatores pró-fibróticos e citoprotetores em modelos experimentais de falência.
Banca:	Francisco Pereira da Silva - Universidade Estadual de Londrina (UEL)
Banca:	Sérgio Seiji Yamada - UEM
Banca:	Eurica Mary Nogami - UEM
Banca:	Andressa de Freitas Mendes Dionísio - Universidade de São Paulo (USP)
Palavras-chave:	Drogas anti-inflamatórias;Profilaxia;Óleo essencial de gengibre;Gengibre (Zingiber officinale Roscoe);Óleo essencial;Droga anti-inflamatória;Nefrotoxidade;Fibrose renal;Talidomida;Cisplatina.
Data do documento:	2013
Editor:	Universidade Estadual de Maringá
Resumo:	Doenças como hipertensão arterial sistêmica (HAS), diabetes mellitus (DM) e obesidade tem sido consideradas como as principais causas pelo aumento da forma epidêmica da doença renal crônica (STENVINKEL; HUNLE., 2010). Muitas das doenças renais primárias apresentam como complicação a fibrose, e são acompanhadas por lesões vasculares renais, com presença ou ausência de hipertensão. O denominador comum de lesão túbulo-intersticial e fibrose têm sido relatados como sendo a ocorrência de isquemia, no caso da nefropatia pós-obstrutiva (KLAHR., 1991; KANETO e cols., 1993) e nefrotoxicidade por ciclosporina. (SHIHAB e cols., 1997, a, b). A isquemia de um órgão ou de um tecido ocorre devido à interrupção da oferta de oxigênio e nutrientes por um período de tempo. A deficiência do suprimento de sangue desencadeia um conjunto de eventos fisiopatológicos bem caracterizados, que determinam lesão e morte celular, em graus variados de disfunção orgânica (SCANNELL 1996). A reperfusão é a restauração do fluxo sanguíneo no tecido isquêmico, com possibilidade de exacerbar lesão isquêmica por liberar espécies reativas de oxigênio (ERO) (KAMINSKI e cols., 2002). Convencionou-se denominar de lesão de isquemia e reperfusão (I/R) (ZIMMERMAMAN & GRAMER., 1994; REILLY e cols., 1991). A lesão de I/R renal é a causa primária da insuficiência renal aguda (IRA) tanto em rins nativos quanto em enxerto (TILNEY; GUTTMANN, 1997). A cisplatina (CP) é uma das drogas anti-cancer mais utilizadas no tratamento de uma variedade de tumores solidos. Entretanto, a dose da cisplatina administrada é limitada pela sua nefrotoxicidade (ALI & MOUNDHRI MS., 2006). A lesão renal aguda é uma desordem comum que se desenvolve em cerca de 25% dos pacientes após altas doses do quimioterapico cisplatina (CHU e cols., 2013). O dano renal provocada pela cisplatina depende da dose e da duração do tratamento. A nefrotoxicidade induzida por cisplatina esta associada ao aumento do estresse oxidativo, que leva à morte da célula renal e disfunção renal irreversível (RUBERA e cols., 1993), onde estão envolvidos espécies reativas de oxigênio (ERO) e inflamação na patogenese desta doença (BADARY e cols., 2005). A fibrose é causada por uma injuria renal, que envolve uma acumulação adicional de matriz extracelular, onde estruturas especializadas vão sendo substituídas por colágeno e conduz geralmente à perda de função quando o tecido normal é substituído com o tecido da cicatriz. A produção contínua de fibrose glomerular e intersticial acaba por determinar perda progressiva dos néfrons e da filtração glomerular. Várias doenças renais evoluem para um estágio final de insuficiência renal com esclerose glomerular e fibrose intersticial (BOHLE e cols., 1996). Doenças fibroproliferativas podem afetar quase todos os tecidos e órgãos, incluindo a pele, rins, pulmões, sistemas vasculares, olhos, fígado, pâncreas e intestino. A fibrose tecidual é uma das principais causas de morbidade e mortalidade. Estima-se que 45% das mortes nos Estados Unidos podem ser atribuídos a doenças fibróticas (WYNN 2008). A fibrose intersticial renal também é a maior complicação do tratamento com cisplatina (CP), que estimula o fator de crescimento e transformador beta (TGF-β) e Smad como via de sinalização (PARK e cols., 2013). A talidomida é um agente imunomodulador e anti-inflamatório utilizado em desordens auto-imunes. Tem sido demonstrado que a talidomida inibe a produção de citocinas pró-inflamatórias, tais como o fator de necrose tumoral (TNF-β), interleucina (IL-1β), IL-6, IL-12, IL-17 e interferão gama (IFN-?), ao mesmo tempo que aumenta a citocina anti-inflamatória IL-10 (Amirshahrokhi & Ghazi-Khansari, 2012). Desta forma, em pacientes portadores de doenças renais, a talidomida poderia lentificar o processo de fibrogênese ao modificar o perfil da expressão gênica de fatores prófibróticos e citoprotetores e, assim, diminuir a fibrose em longo prazo para estabilizar a função renal. Assim, esta tese foi dividida em dois artigos científicos, no primeiro destinado a investigar o efeito do óleo essencial de gengibre (OEG) sobre a nefrotoxicidade induzida pela cisplatina. Neste estudo foi utilizado o modelo experimental de insuficiência renal induzida pela cisplatina em camundongos. Os animais foram tratados com o óleo essencial de gengibre (OEG) nas doses de 100, 200 e 400 mg/kg, ápos a injeção de cisplatina A modulação na expressão de alguns genes envolvidos em processos inflamatórios e em doenças renais tais como: Fator de necrose tumoral (TNF-β) e Proteína morfogenética do osso (BMP-7) foram determinados. Paralelamente, estudamos parâmetros funcionais do órgão como: Razão entre a proteína e creatinina urinária. Há poucos estudos com óleos essencias envolvendo o tratamento de doenças renais. Portanto, o óleo essencial de gengibre poderia estabilizar a função renal e modular a expressão de genes como: Fator de crescimento e transformador beta (TNF-α) e Proteína morfogenética do osso (BMP-7), devido a sua ação anti-inflamatória e imunomodulatória. Resultados: Razão entre a proteína e creatinina urinária. Resultados: A razão entre proteína e a creatinina urinária no 3° e no 6° dias, após a injeção de cisplatina foram menores do que no grupo normal. Os grupos que receberam GEO nas doses de 100, 200 e 400 mg/kg, após a injeção de cisplatina aumentou esta razão, respectivamente. Transcrito gênico: TNF-α. O fator de necrose tumoral (TNF-α) é uma citocina envolvida em processos inflamatórios e em doenças renais. Nossos resultados mostraram que os níveis de expressão de RNAm do TNF-? significativamente elevado no 3° e 6° dias, após a injeção de cisplatina comparado com o grupo normal. No entanto, os grupos que receberam GEO após a injeção de cisplatina, inibiu significativamente os níveis de expressão de RNAm nas doses de 100, 200 e 400 mg/kg, respectivamente, no 6° dia, comparado com o controle.Transcrito gênico: BMP-7. A proteína morfogênica do osso (BMP-7) é membro da superfamília do TGF-β que ativa o Smad6, que, por sua vez, antagoniza a ação deste. O TGF-β é o maior indutor de transição epitélio mesenquimal (TEM) nas células tubulares epiteliais adultas, enquanto BMP-7 reverte a TEM induzida por TGF-β1 e restaura a homeostase das células tubulares (ZEISBERG 2003). Esta proteína foi descrita por proteger contra a lesão isquêmica, agindo no epitélio do túbulo proximal reduzindo a expressão de TNF-α estimulado por MCP-1 e IL-8. Além disso, reduziu os níveis de citocinas pró-inflamatorias como IL-6 e IL-1?, seguida da redução na infiltração de macrófagos que pode explicar seu efeito protetor (GOULD 2002). Em nossos resultados os níveis de expressão do RNAm no 3° e 6 dias, após a injeção de cisplatina foram significativamente menores do que o controle. Os grupos que receberam GEO nas doses de 200 e 400 mg/kg após a injeção de cisplatina aumentaram significativamente o nível de expressão do RNAm de BMP-7, respectivamente, em comparação com o controle. No entanto, não houve um aumento significativo no nível de expressão de BMP-7 no grupo que recebeu GEO na dose de 100 mg/kg. Conclusão: O tratamento com o óleo essencial de gengibre foi efetivo, restaurando a disfunção renal induzida pela cisplatina. Este trabalho foi aceito no periódico Tropical Journal of Pharmaceutical Reasearch (ISSN: 1596-5996). No segundo artigo submetido na forma de Short commumication, foi avaliado o efeito da talidomida em camundongos, sobre o processo de fibrogênege renal em modelo experimental de obstrução unilateral do ureter (UUO). Já é descrito que a talidomida tem atividade anti-imune ao modificar o perfil da expressão gênica de fatores pró-fibróticos e citoprotetores. O modelo de obstrução unilateral do ureter (UUO), é um modelo usado bem estabelecido para o modelo de fibrose renal. Os animais foram pré-tratados com a talidomida antes da obstrução em diferentes tempos de tratamento. Neste modelo avaliamos a expressão de genes envolvidos em processos inflamatórios e em doenças renais tais como TGF-β e citoprotetor BMP-7 no tecido destes animais. A expressão desses genes foi estudada por PCR em tempo real. Paralelamente, estudamos parâmetros funcionais do órgão tais como: Razão entre a proteína e creatinina urinária. Resultados: Razão entre a proteína e creatinina urinária. Os níveis da razão entre à proteína e creatinina urinária foi avaliada em todos os grupos no 1°, 4°, 7° e 14° pós-operatórios. No entanto, quando analisamos o grupo entre si, não observamos diferença estatística. Transcrito gênico: TGF-?. A citocina Fator de Crescimento e Transformador Beta (TGF-?) é um peptídeo multifuncional que controla a diferenciação, a proliferação e outras funções em muitos tipos celulares. Alterações na sua expressão, ativação e sinalização podem resultar na apoptose celular (SHARMA; ZIYADEH, 1994). Além disso, estimula a quimiotaxia e a produção de colágeno e fibronectina pelas células, enquanto inibe a degradação de colágeno pela diminuição de proteases e o aumento de inibidores de proteases. Todos esses efeitos favorecem à fibrogênese, e há, cada vez mais evidências de que o TGF-β esteja envolvido no desenvolvimento de fibrose numa variedade de condições de inflamação crônica. Transcrito gênico: BMP-7. Muitas ações do TGF-β são antagonizadas por moléculas como o BMP-7, reconhecido como um gene anti-fibrótico. Desta forma, interessamos a estudar sua expressão e seu comportamento nos animais tratados com a talidomida diariamente. Razão da expressão dos transcritos gênicos TGF-?/BMP-7. O desenvolvimento temporal da fibrose promoveu um aumento significativo da razão no 1°, 4°, 7° e no 14° pós-operatório respectivamente, comparado com os animais normais, sendo de maior intensidade no 7° e 14° pósoperatórios. O tratamento dos animais submetidos à Obstrução Unilateral do Ureter (UUO) com talidomida promoveu uma redução nesses índices, restaurando aos níveis de expressão do grupo normal no 7° e 14° pós-operatórios. Por outro lado no 1° e 4° pósoperatórios os níveis de expressão destes, foram similares aos animais submetidos à UUO no 1° e 4° pós-operatórios respectivamente. Conclusão: O tratamento com a talidomida foi eficaz em estabilizar a função renal e prevenir à fibrose renal. Este trabalho foi submetido ao periódico Medical Principles and Pratice na forma de short communication. O conhecimento de mecanismo envolvido em doenças renais é importante para a profilaxia e tratamento de pacientes portadores de diversas causas de falência renal. A terapia medicamentosa é restrita e de baixa eficácia terapêutica. Assim, a descoberta de novas drogas e dos mecanismos da doença auxiliará a morbi-mortalidade destes pacientes. Nesta tese avaliamos novas possibilidades terapêuticas para a profilaxia e tratamento de pacientes renais. Obviamente, novos estudos devem ser realizados para melhor evidenciar o efeito desta droga.
URI:	http://repositorio.uem.br:8080/jspui/handle/1/1970
Aparece nas coleções:	3.3 Tese - Ciências da Saúde (CCS)

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