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Authors: Moreira, Neide Martins
Orientador: Silvana Marques de Araújo
Title: Influência do exercício físico moderado pré-infecção sobre a parasitemia, neurônios mientéricos, patologia e imunologia de camundongos infectados experimentalmente por Trypanosoma cruzi
Banca: Débora de Mello Gonçales Sant'Ana - UEM
Banca: Solange Marta Franzói de Moraes - UEM
Banca: Áurea Regina Telles Pupulin - UEM
metadata.dc.contributor.referee4: Laura Beatriz Mesiano Maifrino - Universidade São Judas Tadeu
Keywords: Exercício físico moderado;Cólon;Plexo mientérico;Trypanosoma cruzi;Doença de Chagas;Parasitologia;TNF-α;TGF-β;Brasil.;Moderate physical exercise;Trypanosoma cruzi;Colon;Myenteric plexus;TNF-α;TGF-β;Brazil.
Issue Date: 2014
Publisher: Universidade Estadual deMaringá
Resumo: O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, ao invadir o hospedeiro atinge uma ampla variedade de tecidos, incluindo coração, intestinos/esôfago e sistema nervoso central. O megaesôfago e o megacolo são descritos como as principais lesões do trato gastrointestinal, e os distúrbios de motilidade estão associados à constipação e dilatação de vísceras, acompanhados ou não de espessamento da parede intestinal, processos decorrentes da destruição de neurônios do Sistema Nervoso Entérico - SNE. A prática do exercício físico moderado tem contribuído de forma significativa para a manutenção do número de neurônios mientéricos. Da mesma forma, o exercício físico moderado representa um fator de resistência ao desenvolvimento de infecções causadas por protozoários em animais, atuando como estimulador da resposta imunológica. No entanto, não estão disponíveis relatos de alterações produzidas no plexo mientérico e na parede do cólon de camundongos submetidos ao exercício físico moderado e infectados por T. cruzi. Sendo assim, este trabalho verificou a influência do exercício físico moderado sobre neurônios da população neuronal mientérica total, neurônios metabolicamente mais ativos, neurônios nitrérgicos e da parede do cólon de camundongos infectados por T. cruzi relacionadas a aspectos parasitológicos e imunológicos da infecção. Foram utilizados 120 camundongos suíços machos com 30 dias de vida distribuídos em quatro grupos: Treinado Controle (TC), Treinado Infectado (TI), Sedentário Controle (SC) e Sedentário Infectado (SI). Os grupos TC e TI foram submetidos a programa de exercício físico moderado em esteira rolante, durante oito semanas. Três dias após o término do exercício físico os grupos TI e SI foram inoculados com 1300 tripomastigotas sanguíneos da cepa Y de T. cruzi. A indução da fase crônica foi obtida administrando-se cinco doses de LAFEPE BENZNIDAZOL, três doses (100 mg/Kg/m.c. aos 11, 15 e 22 dias após a inoculação, dpi) e duas doses (250 mg/Kg/m.c. aos 18 e 41 dpi), respectivamente. A parasitemia foi avaliada do 4º. - 61º. dias após inoculação. Após 75 dias de infecção foram quantificados/medidos neurônios da população neuronal mientérica total (Giemsa), neurônios metabólicamente mais ativos (NADH-diaforase) e imunorreativos a nNOS (Imunofluorecência) (5 animais/grupo/técnica). Foi ainda mensurada a espessura da parede intestinal, para evidenciação histoquímica de linfócitos intra-epiteliais (LIE), focos inflamatórios (Hematoxilina-Eosina) células caliciformes positivas a (Periodic Acid Schiff (PAS) e ao Alcian Blue (AB) pH 1,0+ e 2,5+ - 10 animais/grupo), dosados fator de necrose tumoral-alfa (TNF-&#945; ) e fator de crescimento transformador-&#946; (TGF-&#946;) no plasma (ELISA - 10 animais/grupo). Os resultados foram comparados com os testes ANOVA seguido pelo teste Tukey e KrusKall-Wallis, com significância de 5%. O exercício físico moderado reduziu o pico de parasitos no 8º dia de infecção (TI: 4,0 x 106 e SI: 9,8 x 106 tripomastigotas/mL) (P=0,0132) e a parasitemia total (TI: 9,4 x 106 e SI: 16,9 x 106 tripomastigotas/mL) (p=0,0307). Contribuiu para a sobrevivência do número de neurônios da população neuronal mientérica total em 8,0% (TI x SI - p<0,05), neurônios NADH-d em 26,0% (TI x SI - p<0,01) e neurônios imunorreativos a nNOS em 16,8% no grupo (TI x SI - p<0,05). A infecção por T. cruzi causou redução do número de neurônios da população neuronal mientérica total em 39% (SI x SC - p<0,05), neurônios NADH-d em 38,7% (SI x SC - p<0,01) e neurônios imunorreativos a nNOS em 47,7 (SI x SC - p<0,05). O exercício físico provocou hipertrofia de neurônios mientéricos com aumento da área nuclear e citoplasmática o que resultou no aumento da área do corpo neuronal da população neuronal mientérica total (p<0,05), de neurônios NADH-d (p<0,05), de neurônios nitrérgicos (p>0,05) e no aumento da espessura total da parede intestinal em 7,3% (TI x SI - p<0,05). Nos animais sedentários a infecção por T. cruzi provocou redução da espessura total da parede intestinal em 6,7% (SI x SC - p<0,05). O exercício físico promoveu aumento de 5,7% do número de LIE (TI x SI - p<0,05) em relação ao número de enterócitos. Nos animais sedentários a infecção promoveu redução de 39,0% (SI x SC - (p>0,05)) da proporção de LIE. Nos animais treinados, a proporção de células caliciformes produtoras de mucinas neutras (PAS+) e ácidas (AB pH 2,5+) e (AB pH 1,0+) estava reduzida em 2,0%, 15,0% e 18,0% relação aos animais sedentários (p<0,05). O exercício físico moderado impediu a formação de focos inflamatórios na túnica muscular intestinal em 72,2% para TI x SI (p<0,01). O TNF-&#945; e TGF-&#946; estavam aumentados em 18,0% (p<0,05) e 18,0% (p>0,05) respectivamente, considerando TI x SI. O exercício físico moderado altera a evolução da infecção diminuindo parasitemia na fase aguda da infecção experimental de camundongos com T. cruzi, protege os neurônios mientéricos e induz a hipertrofia de neurônios, significando melhor prognóstico para o animal cronicamente infectado com relação à manutenção do peristaltismo intestinal. Além disso, provoca aumento da espessura total da parede intestinal, aumento do número de linfócitos intra-epiteliais/enterócitos, redução da proporção de células aliciformes enterócitos e do número de focos inflamatórios e aumento da síntese de TNF-&#945; e TGF-&#946;. Estes resultados aprofundam a fundamentação já consistente e sólida dos benefícios que o exercício físico representa para a população de maneira geral e agora, especificamente para indivíduos.
Abstract: Trypanosoma cruzi, etiologic agent of Chagas' disease by invading the host reaches a wide variety of tissues, including heart, ntestine esophagus and central nervous system. Megaesophagus and megacolon are described as the main lesions of the gastrointestinal tract, and motility disorders are associated with constipation and swelling of viscera, with or without thickening of the intestinal wall, proceedings relating to the destruction of neurons in the enteric nervous system - SNE. The practice of moderate physical exercise has contributed significantly to the maintenance of the number of myenteric neurons. Likewise, moderate physical exercise is a factor of resistance to the development of protozoal infections in animals, acting as a stimulator of immune response. However, reports of changes produced in the myenteric plexus and the wall of the colon of mice subjected to moderate exercise and infected by T. cruzi not disposable. Thus, this study examined the influence of moderate physical exercise on neurons of the total myenteric neuronal population, more metabolically active neurons, nitrergic neurons and the wall of the colon of mice infected with T. cruzi related aspects parasitologic and immunologic of infection. A total of 120 male Swiss mice at 30 days of age divided into four groups: Trained Control (TC), Trained Infected (TI), Sedentary Control (SC) and Sedentary Infected (SI). CT and TI groups underwent moderate exercise program on a treadmill for eight weeks. Three days after the exercise groups TI and SI were inoculated with 1300 blood trypomastigotes of the Y strain of T. cruzi. The induction of chronic phase was achieved by administration of five doses of benznidazole LAFEPE three doses (100 mg/Kg/b.m to 11, 15 and 22 days after inoculation, dpi) and two doses (250 mg/Kg/b.m at 18 and 41 dpi), respectively. The parasitemia was evaluated in the day 4 to day 61 after inoculation. After 75 days of infection were quantified/measured neurons of total myenteric neuronal population (Giemsa), more metabolically active neurons, (NADH-diaphorase) and immunoreactive neurons nNOS (immunofluorescence) (5 animals/group/technical). It was further measured the thickness of the intestinal wall, to show staining of intraepithelial lymphocytes (IEL) inflammatory foci (hematoxylin-eosin) positive goblet cells (Periodic Acid Schiff (PAS) and Alcian blue (AB) pH 1.0+ and 2.5+-10 animals/group), measured tumor necrosis factor-alpha (TNF-&#945;) and transforming growth factor-b (TGF-b) in plasma (ELISA - 10 animals/group). The results were compared with ANOVA followed by Tukey test and Kruskal-Wallis test with a significance level of 5%. Moderate physical exercise reduced the peak of parasites xiii on day 8 of infection (TI: 4.0 x 106 and SI: 9.8 x 106 trypomastigotes /mL) (p = 0.0132) and total parasitemia (TI: 9.4 x 106 and IS: 16.9 x 106 trypomastigote/mL) (p = 0.0307). Contributed to the survival of the number of neurons in the total myenteric neuronal population 8.0% (TI x SI - p <0.05), NADH-d neurons in 26.0% (TI x SI - p <0.01) and immunoreactive neurons nNOS 16.8% in the group (TI x SI - p <0.05). Infection by T. cruzi caused a reduction in the number of neurons in the total myenteric neuronal population 39% (SI x SC - p <0.05), NADH-d in 38.7% (SI x SC - p <0.01) and immunoreactive neurons nNOS in 47.7 (SI x SC - p <0.05). The exercise physical caused hypertrophy of myenteric neurons with increased nuclear area and cytoplasmic which resulted in increasing the area of the body neuronal in the total myenteric neuronal population (p <0.05), NADH-d (p <0.05), nitrergic neurons (p> 0.05) and an increase in total thickness of the intestinal wall 7.3% (TI x SI - p <0.05). In sedentary animals to infection by T. cruzi caused a reduction of the total thickness of the intestinal wall in 6.7% (SI x SC - p <0.05). The physical exercise promoted an increase of 5.7% of the IELs (TI x SI - p <0.05) compared to the number of enterocytes. In sedentary animals the infection caused a reduction of 39.0% (SI x SC - (p> 0.05)) of proportion of IELs. In the trained animals, the proportion of goblet cells mucin-producing neutral (PAS+) and acidic (pH 2.5 + AB) and (AB + pH 1.0) was reduced by 2.0%, 15.0% and 18 0% compared to the sedentary animals (p <.05). Moderate physical exercise prevented the formation of inflammatory foci in the muscular bowel in 72.2% for TI x SI (p <0.01). TNF-_ and TGF-b were increased by 18.0% (p <0.05) and 18.0% (p> 0.05) respectively, whereas TI x SI. Moderate physical exercise alters the course of infection decreasing parasitemia in the acute phase of experimental infection of mice with T. cruzi protects myenteric neurons and induces hypertrophy of neurons, meaning better prognosis for the animal chronically infected with respect to the maintenance of intestinal peristalsis. Furthermore, it causes increase of the total thickness of the intestinal wall increased number of lymphocytes intra-epiteliais/enterócitos, reducing the proportion of goblet cells/enterocytes and the number of inflammatory foci and increased synthesis of TNF-&#945; and TGF-&#946;. These results deepen the already consistent and solid foundation of the benefits that physical exercise is for the population in general and now, specifically for individuals parasitized by T. cruzi. Lead to real prospects for improvement for these individuals in the context of individual and public health, strengthening the need for deployment of moderate physical activity as a treatment option complementary directed to these individuals.
URI: http://repositorio.uem.br:8080/jspui/handle/1/1977
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