Avaliação in vitro da polimixina B associada à vancomicina contra isolados de Acinetobacter baumannii produtores de carbapenemases

Abstract

Resumo: No presente estudo in vitro, avaliou-se o efeito da combinação de polimixina B e vancomicina contra seis isolados clínicos de Acinetobacter baumannii pertencentes a seis clones diferentes, sendo três sensíveis e três resistentes à polimixina B. A resistência à polimixina B foi investigada também pela pesquisa do gene mcr-1 e pelo teste de frequência de mutantes. A Concentração Inibitória Mínima (MIC) de vancomicina foi avaliada por microdiluição em caldo. O efeito sinérgico da combinação polimixina B-vancomicina foi determinado pelos métodos de checkerboard, time-kill, disco difusão e Etest. No ensaio de checkerboard, todos os isolados de A. baumannii resistentes à polimixina B apresentaram efeito sinérgico (Índice de Fração Inibitória- FICI = 0,5), houve também uma redução das MICs de polimixina B em todos os isolados testados com uma alteração da categoria de resistente para sensível em dois isolados resistentes à polimixina B. No ensaio de time-kill, observou-se atividade bactericida em dois isolados resistentes e um sensível à polimixina B (redução de 3 log10 na contagem de viáveis em 24h). Nenhum antagonismo foi detectado pelos métodos testados. Surpreendentemente, o ensaio de time-kill demonstrou que a combinação polimixina Bvancomicina apresentou efeito bactericida após 24h contra isolados com alta taxa de mutantes para polimixina B, sugerindo que essa combinação pode bloquear a hipermutação de alguns isolados. Todos os isolados resistentes à polimixina B também mostraram sinergismo no teste de disco difusão e diminuição da MIC de vancomicina pelo método Etest. Os resultados sugerem que a combinação polimixina B-vancomicina tem potencial terapêutico contra infecções causadas por A. baumannii resistente à polimixina B. Estudos clínicos complementares devem ser realizados para o uso dessa combinação na prática médica

Abstract: In the present in-vitro study, the effect of combination of polymyxin B and vancomycin was assessed against six Acinetobacter baumannii clinical isolates belonging to six different clusters (three polymyxin B-susceptible and three polymyxin B-resistant). Additionally, polymyxin B-resistance was investigated with mcr-1 gene amplification and mutant frequency assay. Vancomycin minimum inhibitory concentration (MIC) was assessed by broth microdilution. The synergistic effect of the polymyxin B-vancomycin combination was determined with the checkerboard, time-kill, disk-diffusion and Etest assays. In the checkerboard assay, all polymyxin B-resistant isolates showed a synergistic effect (FICI = 0.5). A reduction in polymyxin B-MICs was observed in all isolates tested, with two polymyxin B-resistant isolates changing category from resistant to susceptible. In the time-kill assay, bactericidal activity was observed in two polymyxin B -resistant and one polymyxin B-susceptible isolate (3 log10 reduction in colony count after 24h). No antagonism was detected by the checkerboard, time-kill, disk-diffusion or Etest assay. Unexpectedly, the time-kill assay demonstrated that the polymyxin B-vancomycin combination had a bactericidal effect at 24h against isolates with a high mutant rate for polymyxin B, suggesting that this combination may block the hypermutation of some isolates. All polymyxin B-resistant isolates also showed synergism in the disk-diffusion test, and a significant decrease in vancomycin MICs in the Etest assay. The findings suggest that the polymyxin B-vancomycin combination has a potential therapeutic effect, especially against infections caused by polymyxin B-resistant A. baumannii. Additional clinical studies to evaluate the use of this combination in medical practice are warranted