Histopatogenicidade de Blastocystis SP para camundongos Swiss

Abstract

RESUMO: Blastocystis sp é um protozoário entérico com poucos estudos sobre o seu potencial patogênico em modelos experimentais. Neste trabalho a patogenicidade de Blastocystis sp no trato gastrointestinal de camundongos foi avaliada de acordo com o inóculo e tempo de infecção. Camundongos Swiss machos foram infectados, via intragástrica, com 100, 500, 1.000, 5.000 e 10.000 formas císticas de Blastocystis sp obtidas a partir de uma mistura de oito isolados humanos cultivados em meio Jones. Após 7, 14, 21, 28 e 60 dias de infecção os animais foram sacrificados e fragmentos do intestino delgado (duodeno), grosso e ceco foram retirados para análise histopatológica. Concomitantemente à infecção dos animais, as formas císticas dos isolados foram lavadas e purificadas para a extração de DNA. O gene de RNA ribossomal (SSU-rRNA) foi amplificado e os produtos foram digeridos com a enzima de restrição AluI para a análise do polimorfismo do tamanho do fragmento de restrição (RFLP). Blastocystis sp desencadeou resposta inflamatória nos diferentes tecidos analisados, com predominância de infiltrado mononuclear. Foi observada uma predileção pelo ceco com caráter invasivo pelo encontro de cistos na túnica muscular. Inóculos maiores desencadearam processos inflamatórios mais precocemente (7 dias) e inóculos menores mais tardiamente (a partir de 21 dias). A análise molecular identificou os subtipos 1 e 3 que não puderam ser relacionados com a patogenicidade, pois os inóculos foram obtidos a partir de uma mistura de isolados. Conclui-se que no modelo proposto a patogenicidade dos isolados de Blastocystis sp aqui estudados tem relação com o inóculo e tempo de infecção

ABSTRACT: Blastocystis sp is an enteric protozoan with few studies about its pathogenic potential in experimental models. In this work the Blastocystis sp pathogenicity in gastrointestinal tract of mice was evaluated according to the inoculum and duration of infection. Male Swiss mice were infected intragastrically, with 100, 500, 1,000, 5,000 and 10,000 Blastocystis sp cystic forms which were obtained from a mixture of eight isolated human who were cultured in Jones medium. After 7, 14, 21, 28 and 60 days of infection, the animals were sacrificed and fragments of the small, large and cecum intestine were taken for histopathological analysis. Concomitantly to animals infection, the cystic forms of the isolated human were washed and purified for DNA extraction. The gene of ribosomal RNA (SSU-rRNA) was amplified and the products were digested with AluI restriction enzyme to analyze the restriction fragment length polymorphism (RFLP). Blastocystis sp triggered inflammatory response in different tissues that were analyzed, predominantly mononuclear infiltrate. A predilection by the cecum intestine with invasive character was observed by finding cysts in the muscular layer. Greater inocula triggered earlier inflammatory processes (7 days) and smaller inocula, later (from 21 days). Molecular analysis identified subtypes 1 and 3 that could not be related to pathogenicity, because the inocula were obtained from a mixture of isolated. We concludethat in the proposed model the pathogenicity of Blastocystis sp isolates studied, is related tothe inoculum and duration of infection