Identificação molecular de Pyrenophora teres da cevada e avaliação da sensibilidade in vitro a fungicidas

Abstract

RESUMO: O controle químico com fungicidas é a principal medida de controle da mancha-em-rede da cevada, causada pelo fungo Pyrenophora teres, no sul do Brasil. No entanto, na região centro-sul do Paraná constatações de deficiências no controle químico da doença têm sido frequentes nas últimas safras, o que tem suscitado a suspeita de ocorrência de redução da sensibilidade do fungo aos fungicidas utilizados. Assim, o objetivo do estudo foi coletar uma população de isolados de P. teres na região centro-sul do Paraná, proceder a identificação molecular dos isolados mediante análise de sequências de DNA das regiões ITS e gene 5.8S do DNA ribossomal e avaliar a sensibilidade in vitro dos isolados a fungicidas. A identificação molecular permitiu a confirmação de espécies P. teres. Foram avaliados fungicidas dos grupos químicos Triazol e Estrobirulina, além de misturas de Estrobilurina e Carboxamida, Triazol e Ditiocarbamato e de Triazol e Dicarboximida, recomendados para o controle de manchas na cultura da cevada. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial com três repetições, sendo cada repetição composta por uma placa de Petri. As concentrações de ingrediente ativo utilizados variaram de acordo com o fungicida, visando obter os valores reais da concentração inibitória de 50% do crescimento micelial (CI50). Os fungicidas foram previamente solubilizados em água esterilizada e, posteriormente, adicionados ao meio de batata-dextrose-ágar (BDA) fundente, obtendo-se os substratos em diferentes concentrações. As placas foram incubadas em câmara de crescimento durante sete dias com regime de 24 horas no escuro a 21°C±2. A partir do diâmetro das colônias realizou-se análise de regressão para a obtenção da CI50 para cada isolado. Os Triazóis testados (Propiconazol, Tebuconazol, Metconazol, Ciproconazol e Epoxiconazol), apresentaram maior toxicidade ao fungo que as Estrobirulinas (Piraclostrobina, Picoxistrobina e Azoxistrobina). Em relação aos fungicidas do grupo Triazol, verificou-se a ocorrência de insensibilidade para o fungicida Ciproconazol; e em relação aos fungicidas do grupo Estrobilurina, verificou-se a ocorrência de isolados insensíveis à Picoxistrobina e Azoxistrobina. Os isolados de Pyrenophora teres apresentaram variações de sensibilidade às moléculas estudadas, evidenciando que a dificuldade de controle da mancha-em-rede pode ser devido a redução na sensibilidade do patógeno a alguns fungicidas empregados no controle da doença

ABSTRACT: Chemical control with fungicides is the main control measure of net blotch of barley caused by the fungus Pyrenophora teres in southern Brazil. However, in the south-central region of Paraná, deficiencies in the chemical control of the disease have been frequent in the recent seasons, which has led to the suspicion of reduced fungal sensitivity to the fungicides used. The objective of the study was to collect a population of P. teres isolates in the south-central region of Paraná, to carry out the molecular identification of the isolates based on DNA sequence analysis of the ITS regions and 5.8S gene of the ribosomal DNA, and to evaluate the sensitivity in vitro of the isolates to fungicides. The molecular identification allowed the confirmation of P. teres species for all isolates. Fungicides of the chemical group triazole and strobirulin were evaluated, as well as mixtures of strobilurin and carboxamide, triazole and dithiocarbamate, and triazole and dicarboxamide. The experimental design was completely randomized, in a factorial scheme with three replicates, and each repetition being composed of a Petri dish. The concentrations of active ingredient used varied according to the fungicide, aiming to obtain the values of the inhibitory concentration of 50% of the mycelial growth (IC50). The fungicides were previously solubilized in sterilized water and subsequently added to the potato-dextrose-agar medium (BDA), obtaining the substrates in different concentrations. Plates were incubated in a growth chamber for seven days with a 24 hour dark regime at 21± 2C. The IC50 values were calculated based on a regression analysis of diameter of the colonies in the different fungicide concentrations. The triazoles tested (propiconazole, tebuconazole, metconazole, cyproconazole and epoxoconazole) showed greater toxicity to P. teres than the estrubirulins (pyraclostrobin, picoxystrobin and azoxystrobin). Regarding to the trizole fungicides, it was observed insensitivity to cyproconazole; and regarding to the strobilurin fungicides, it was observed the some isolates presented insensitivity picoxystrobin e azoxystrobin. The P. teres isolates presented variation in sensitivity to all fungicides included in the study, evidencing that the difficulty of controlling the net stain may be due to the reduction in the sensitivity of the pathogen to some fungicides used to control the disease