Separação e identificação de marcadores químicos de Fusarium oxysporum utilizando CLAE/ESI/EM-EM objetivando desenvolver método analítico para identificação do fungo

Abstract

RESUMO: Fusarium geralmente são encontrados na natureza, em solos como sapróbios ou em plantas como fitopatógenos. Espécies de Fusarium possuem ampla diversidade e são responsáveis por pragas de importância econômica, como murcha ou podridão da raiz. F. oxysporum atinge uma vasta variedade de hospedeiros e pode resultar na redução da qualidade e da produtividade, podendo causar danos irreversíveis às culturas e prejuízos econômicos. É um agente patogênico emergente de seres humanos, principalmente imunocomprometidos, e outros mamíferos. Estudos sobre a constituição dos micro-organismos e de seus metabólitos possibilitam relacionar compostos químicos específicos (marcadores químicos) com a presença dos micro-organismos, abrindo a possibilidade para se desenvolver métodos analíticos rápidos para identificação do fungo, uma vez que não é necessário realizar culturas dos mesmos. Assim, neste trabalho é desenvolvido método analítico utilizando métodos de extração e cromatografia líquida de alta eficiência com detectores por arranjo de diodos e espectrometria de massas para separar e identificar marcadores químicos que possam ser utilizados na identificação do fungo, foi possível identificar alguns dos principais metabólitos do fungo F. oxysporum em meio Czapek-Dox com o método de extração em C18 e eluição com acetonitrila e caracterização por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas, sendo eles ácido fusarinólico, ácido 9,10-deidrofusarico e ácido fusárico. A aplicação em amostras reais possibilitou identificar um dos marcadores (ácido fusarinólico, íon de m/z 196), demonstrando a viabilidade de se desenvolver um método analítico que dispense a cultura de fungos para identificá-los; com vantagens quanto ao custo e tempo de análise, pois exclui a necessidade de análise morfológica e aspectos microscópicos das culturas

ABSTRACT: Fusarium are generally found in nature as saprophyte and phytopathogens, Fusarium species have wide diversity and are responsible for pests of economic importance, such as wilt or root rot. F. oxysporum reaches a wide variety of hosts, in agriculture can result in reduced quality and productivity, may cause irreversible damage to crops and economic losses. It is an emerging pathogen of humans, especially immunocompromised, and other mammals. Studies on the formation of microorganisms and their metabolites enable linking specific chemical compounds (chemical markers) with the presence of microorganism, leading to the possibility to develop rapid analytical methods for identification of fungus, since it is not necessary to perform its cultures. Thus, in this work is developed analytical method using extraction method and high performance liquid cromatography with diode array and mass spectrometry detection to separate and identify chemical markers which can be used in the identification of fungi, it was possible to identify some of the major metabolites of F. oxysporum on Czapek-Dox medium with the extraction method with C18 cartridge and eluting with acetonitrile, characterization by high-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry, they being fusarinolic acid, 9,10-dehydrofusaric acid and fusaric acid. The application to real samples showed that it was possible to identify one of the markers (fusarinolic acid ion m/z 196) demonstrating the viability of an analytical method which dispenses the fungal culture to identify them with advantages related to cost and analysis time, it excludes the need for morphological analysis and microscopic aspects of cultures