Estudo químico e avaliação das atividades antitumoral e antileishmania das espécies Lessingianthus intermedius, Vernonanthura crassa e V. nudiflora (ASTERACEAE)

Abstract

RESUMO: O presente trabalho teve como objetivos o estudo fitoquímico das espécies Lessingianthus intermedius, Vernonanthura crassa e Vernonanthura nudiflora, e a avaliação das atividades antitumoral e antileishmania dos extratos bruto, das frações resultantes da partição em solventes e de metabólitos secundários isolados destas espécies. Os extratos brutos de todas as espécies foram submetidos à partição em n-hexano, diclorometano e acetato de etila. As frações diclorometano de L. intermedius (LI-DC), Vernonanthura crassa (VC-DC) e V. nudiflora (VN-DC) foram submetidas a purificação por coluna cromatográfica em sílica flash. Da fração LI-DC foram isolados os flavonóides genkwanina (LI-1), 3-Ometilquercetina (LI-2) e 3,7-di-O-metilquercetina (LI-3); as lactonas sesquiterpenicas 8-O-acetil-13-O-metil vernojalcanolídeo (LI-4), 8?-acetóxi-10?-hidróxi-13-O-metil hirsutinolídeo (LI-5), espicatolídeo (LI-6) e a lignana siringaresinol (LI-7). O fracionamento da fração diclorometano (VC-DC) da espécie V. crassa resultou no isolamento de uma lactona sesquiterpênica 8?-metilacriloiloxi-10-hidróxi-13-O-metil-hirsutinolídeo (VC-1), uma lactona monoterpênica loliolida (VC-2). Da fração diclorometano da espécie V. nudiflora (VN-DC) foram identificadas as lactonas sesquiterpênicas (VN-1), piptocarfol C (VN-1a) e um análogo do espicatolídeo E, inédito na literatura (VN-1b). A purificação da fração hidrometanólica de L. intermedius (LI-HM) e acetato de etila de V.crassa (VC-AE) por CC em Sephadex LH-20 resultou no isolamento de uma mistura dos ácidos 3-O-cafeoilquínico (LI-8a), ácido 4-Ocafeoilquínico (LI-8b), e ácido 5-O-cafeoilquínico (LI-8c), da espécie L. intermedius e, das flavonas 2-(S)/2-(R)-eriodictiol-7-O-glucoronídeo (VC-3) e vitexina (VC-4) de V. crassa. As substâncias isoladas foram identificadas por análises espectroscópicas, espectrométricas e comparação com dados na literatura. Foram realizadas também análises de LC-MS e quimiométrica (PCA) das frações diclorometano de L. intermedius (LI-DC) e V. crassa (VC-DC) e das substâncias LI-4, LI-5 e VC-1. Todas as substâncias isoladas de Lessingianthus intermedius, V. crassa e V. nudiflora são descritas nestas espécies pela primeira vez. As lactonas sesquiterpenicas 8?-acetóxi-10?-hidróxi-13-O-metil hirsutinolídeo (LI-5), espicatolídeo (LI-6), 8?-metilacriloiloxi-10-hidróxi-13-Ometil-hirsutinolídeo (VC-1) e piptocarfol C (VN-1a) isoladas neste trabalho de Lessingianthus intermedius, V. crassa e V. nudiflora já foram descritas para estes gêneros. Isto nos leva a sugerir que as lactonas sesquiterpênicas, da classe dos hirsutinolídeos, possam ser consideradas marcadores químicos destes gêneros. Os resultados dos ensaios de atividade antitumoral apontaram que a fração mais ativa de L. intermedius e Vernonanthura crassa foi a diclorometano (LI-DC) e (VC-DC), respectivamente com GI50 variando de 1,20 a 11,50 ?g/mL para LI-DC e GI50 de 5,10 a 24,40 para VC-DC. A avaliação da atividade leishmanicida dos extratos e frações de L. intermedius e V. crassa mostrou que as frações diclorometano (VC-DC) e (LIDC) apresentaram maior atividade, com CI50 de 8,97 ?g/mL e 9,15 ?g/mL, respectivamente. As demais amostras apresentaram atividade leishmanicida moderada. Estes resultados indicam que as atividades observadas para as frações diclorometano destas plantas devem-se, provavelmente, a presença das lactonas sesquiterpênicas

ABSTRACT: The present work aimed the phytochemical study of the species Lessingianthus intermedius, Vernonanthura crassa and Vernonanthura nudiflora, and the evaluation of antitumor and antileishmania activities of crude extracts and fractions, resulting from its partition in solvents, as well as the secondary metabolites isolated from these species. The crude extracts of all species were submitted to partition in n-hexane, dichloromethane and ethyl acetate. The dichloromethane fractions of L. intermedius (LI-DC), Vernonanthura crassa (VC-DC) and V. nudiflora (VN-DC) were purified by chromatographic column in silica flash. From the fraction LI-DC were isolated the flavonoids genkwanin (LI-1), 3-O-methylquercetin (LI-2) and 3.7-di-O-methylquercetin (LI-3); the sesquiterpene lactones 13-Omethylvernojalcanolide 8-O-acetate (LI-4), 8-?-acetoxy-10-?-hydroxy-13-Omethylhirsutinolide (LI-5), spicatolide E LI-6) and the lignan siringaresinol (LI-7). The fractionation of dichloromethane fraction (VC-DC) from V. crassa resulted in the isolation of a sesquiterpene lactone 8-?-methacryloyloxy-10-?-hydroxy-13-O-methylhirsutinolide (VC-1), the terpene lactone loliolide (VC-2). The dichloromethane fraction of V. nudiflora (VN-DC) afforded the sesquiterpene lactones (VN-1), piptocarphol C (VN-1a), and a new compound, identified as an spicatolide analogue (VN-1b ). The hydro-methanol fraction of L. intermedius (LI-HM), and the ethyl acetate fraction of V.crassa (VC-AE) were purified by CC on Sephadex LH-20, which gave a mixture of 3-O-caffeoylquinic (LI-8a), 4-O-caffeoylquinic (LI-8b), e 5-O-caffeoylquinic acid (LI-8c) acids, from L. intermedius, and the flavones 2-(S)/2-(R)-eriodictyol-7-O-glucoronide (VC-3) and vitexin (VC-4) from V. crassa. All compounds isolated from L. intermedius, V. crassa and V. nudiflora are being described in these species for the first time. The isolated compounds were identified by analysis of their spectroscopic data and by comparison with those described in the literature. Were also held LC-MS and chemometric analysis (PCA) of dichloromethane fractions of L. intermedius (LI-DC) and V. crassa (VC-DC) and LI-4 substances, LI-5 and VC-1. The sesquiterpene lactones 8-?-acetoxy-10-?-hydroxy-13-Omethylhirsutinolide (LI-5), spicatolide E (LI-6), 8-?-methacryloyloxy-10-?-hydroxy-13-O-methylhirsutinolide (VC-1) and piptocarphol C (VN-1a) have been described for the genus studied in this work. This suggest that the sesquiterpene lactones of the hirsutinolide class can be considered as chemical markers of the Lessingianthus and Vernonanthura genus. The assays results showed significant antitumor activity to the dichloromethane fractions (LI-DC) and (VC-DC) of L. intermedius and V.crassa, with GI50 values ranging from 1.20 to 11.50 ?g/mL, and 5.10 to 24.40 ?g/mL, for LI-DC and VC-DC, respectively. These fractions were also the most active against Leishmania amazonensis, with IC50 of 8.97 ? g/mL, and 9.15 ?g/mL for (VC-DC) and (LI-DC), respectively. The other fractions showed moderate leishmanicida activity. These results indicate that the presence of sesquiterpene lactones is, probably, the responsible by the activity of the dichloromethane fraction