Avaliação do efeito dos medicamentos homeopáticos Phosphorus e bioterápico de soro e galinha (Gallus gallus domesticus) na infecção experimental por Trypanosoma cruzi

Abstract

RESUMO: A doença de Chagas, também denominada tripanossomíase americana é resultante da infecção causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, descrita, por Carlos Ribeiro Justiniano Chagas (1909). Limitada, primariamente ao continente americano, em virtude da distribuição de mais de 150 espécies do inseto vetor, atualmente é diagnosticada em quase todos os continentes devido aos movimentos migratórios. Embora seja um problema de saúde global, é classificada pelo Ministério da Saúde brasileiro como "Negligenciada", não despertando interesse da indústria farmacêutica. No momento, o Brasil dispõe somente do benznidazol para o tratamento etiológico desta infecção. Contudo, este medicamento pode provocar efeitos colaterais importantes e possui baixa eficácia na fase crônica da doença. Assim, a procura de um tratamento etiológico complementar/alternativo tem sido o objetivo de muitos pesquisadores. Nesse contexto, a homeopatia surge como uma opção para enfrentamento da infecção, com redução de efeitos colaterais e de toxicidade proporcionada pelo tratamento alopático com o benznidazol. Alguns trabalhos já demonstraram, experimentalmente, a diminuição da parasitemia e de efeitos colaterais, com evolução clínica mais favorável devido ao tratamento com uma associação de benznidazol com uma composição do mesmo medicamento ultradíluido associada à redução de efeitos colaterais e com evolução clínica mais favorável. O efeito de medicamentos altamente diluídos vem sendo demostrado em diversos experimentos usando a infecção por T. cruzi como modelo ou outras infecções, por vários grupos de pesquisa. Na homeopatia, podem ser utilizados medicamentos repertorizados segundo a teoria de Hahnemann ou bioterápicos feitos a partir de material biológico. Aqueles preparados a partir de soro de animal sadio tem efeito significativamente melhor que o efeito de preparados a partir de soro de animal infectado por T. cruzi. Da mesma forma, medicamento preparado a partir de soro de espécie mais resistente ao T. cruzi, tem melhor efeito que aquele preparado a partir de soro de espécie mais suscetível. A hipótese que surge é que o organismo tratado usa o medicamento como modelo de atuação. A cepa Y de T. cruzi tem o curso de infecção bem conhecido. Essa cepa apresenta alta virulência e patogenicidade para camundongos Swiss observando-se, invariavelmente morte da grande maioria dos animais não tratados mesmo com inóculo baixo. Por conseguinte, o percentual de sobrevivência pode constituir-se em importante marcador para o direcionamento de novos experimentos. Outros roedores como os ratos (Rattus norvegicus) também têm sido bastante utilizados em pesquisas com o T. cruzi por possuírem características genéticas e fisiológicas semelhantes aos humanos, permitindo a avaliação de vários parâmetros que facilitam a interpretação do desenvolvimento de doença nos seres humanos. A resposta inflamatória, principal evento da patogênese da infecção por T. cruzi, é desencadeada por uma série de eventos nos quais estão envolvidos macrófgos, óxido nítrico, citocinas pró e anti-inflamatórias que atuam sinergicamente para modular a resposta imune no hospedeiro que, se equilibrada pode induzir a sobrevivência à infecção. Nesse sentido, a presente tese tem o objetivo de avaliar in vivo o efeito de medicamentos homeopáticos em roedores (Rattus norvegicus e Mus musculus) experimentalmente infectados por Trypanosoma cruzi, considerando parâmetros clínicos, imunológicos e parasitológicos. No primeiro artigo, foi testado o medicamento Phosphorus 13cH em ratos. Observou-se que o tratamento com Phosphorus provoca aumento significativo da produção de citocinas pró-inflamatórias INF-? e TNF-? durante o curso da infecção em relação ao controle. O grupo tratado com Phosphorus apresentou 52,5% menos focos inflamatórios no coração do que o controle. O aumento de citocinas pró-inflamatórias no grupo Phosphorus está relacionado à diminuição significativa do número de focos inflamatórios. No segundo artigo foi testado o efeito do soro de galinha (Gallus gallus domesticus) na dinamização 13cH em camundongos infetados com o protozoário. Foi selecionada a espécie Gallus gallus domesticus porque aves são refratárias à infecção por T. cruzi, oferecendo modelo de resistência para os camundongos infectados a serem tratados. Maior percentual, 42,31% (n=11) dos animais tratados com bioterápico soro de galinha 13cH que no controle (CI) 23,08% (n=3) sobreviveram mais de 2 semanas. O tempo médio de vida (47,3±63,5) dias foi maior (p=0,0069) no grupo 13cH do que no CI (13,0±3,0). A estimativa de sobrevida do 13cH foi de 60,1 dias, enquanto que o CI apresentou menor sobrevida média de 13,9 dias (p=0,0088). A parasitemia e a temperatura sofreram efeito benéfico da medicação utilizada para os animais tratados, sendo estatisticamente diferentes (p=0,0023 e p=0,0285) entre 13cH e CI. A maioria das avaliações clínicas no grupo tratado 13cH apresentaram comportamento próximo ao grupo de animais não infectados (CNI) o que sugere maior equilíbrio do organismo frente à infecção no animal tratado com bioterápico que o observado no grupo CI. A infecção promove aumento das citocinas IFN-? e IL-6. Em CI elas apresentaram níveis aumentados em relação ao 13cH. Este aumento diferenciado sugere que o tratamento ativa o sistema imunológico do animal, porém de forma equilibrada, reduzindo a inflamação e consequentemente os danos teciduais. Embora no 13cH exista aumento de TNF-? entre os tempos avaliados, no grupo tratado não foi observado aumento significativo dessas citocinas quando comparado ao CI, mostrando que o 13cH ativou o sistema imune mas impediu aumento exagerado dos níveis desta citocina no momento de pico de parasitos. Assim, houve estimulo na produção de NO sem, contudo, haver aumento drástico deste reagente (p>0,05) evitando danos teciduais. Esse equilíbrio não foi observado nos animais do grupo CI que apresentou aumento significativo e prejudicial de NO, causando morte mais precoce. Ficou evidenciado comportamento correlacionado no grupo 13cH entre NO e IFN-? no 8º dpi, bem como no 12º dpi quando IFN-? aumentou diretamente proporcional ao TNF-?. Em conclusão, os resultados demonstram: 1) O tratamento com Phosphorus13cH promove efeitos benéficos na infecção por T. cruzi em ratos Wistar, modulando a secreção de IFN-? e TNF-? com redução da inflamação no tecido cardíaco; 2) O tratamento da infecção murina por T. cruzi com soro ultradiluído de animal refratário a esta infecção apresentou modulação diferenciada do sistema imunológico com alteração do curso da infecção e secreção de TNF-?, INF-?, IL6 e NO, promovendo aumento de sobrevida e tempo de vida estimado

ABSTRACT: Chagas disease, also known as American trypanosomiasis caused by Trypanosoma cruzi, was described by Carlos Ribeiro Justiniano Chagas (1909).It is primarily limited to the American continent, due to the distribution of more than 150 species of the insect vector. Currently is diagnosed in almost all continents due to migratory movements. Despite being a global health problem, the Brazilian Ministry of Health classifies this disease as "Neglected", meaning that it does not arouse the interest of pharmaceutical industry.Until now, Brazil has only benznidazole for its etiological treatment. However, this drug can cause significant side effects and has low efficacy mainly on chronic phase. Thus, searching for ethiologic complementary/alternative treatment has been the aim of many researchers. In this context, homeopathy emerges as an option to manage the infection, decreasing side effects and toxicity of benznidazole allopathic treatment. Some studies have already experimentally demonstrated the decrease of parasitemia due to the combination of benznidazole with a composition of the same highly diluted medication associated with the reduction of side effects and with a more favorable clinical evolution.The effect of highly diluted medications has been demonstrated in several experiments using T. cruzi infection or other infections as model, for several research groups. We can use repertorized medication, according Hanheman theory or biotherapic produced from biological material. The compounds prepared with serum from healthy animal have significantly better effects than the effects of the ones prepared with serum from animal infected with T. cruzi. Similarly, a medication prepared with serum from T. cruzi-resistant species has a better effect than the medication prepared with serum from susceptible species. The suggestion is that the organism treated uses the medication as a model of action.The T. cruzi has a well-known course of infection.This strain has high virulence and pathogenicity for Swiss mice, invariably causing the death of most untreated animals even if infected with small inoculum. Therefore, the survival percentage may be an important marker for guiding new experiments. Other rodents, such as rats (Rattus norvegicus), have also been widely used in T. cruzi works due to their genetic and physiological characteristics similar to humans. These features allows the evaluation of several parameters that facilitate the interpretation of disease development in humans. Inflammatory response, the main event of the pathogenesis of T. cruzi infection, is triggered by a series of reactions involving macrophages, nitric oxide, pro and anti-inflammatory cytokines that act synergistically in order to modulate the immune response in the host. If those reactions are balanced, they may induce survival to infection. In this sense, the present wok aims to evaluate in vivo effects of homeopathic dilutions in hosts (Rattus norvegicus and Mus musculus) experimentally infected with T. cruzi, considering clinical, immunological and parasitological parameters.The highly diluted repertorized medication Phosphorus 13cH was tested in rats. It was observed that treatment with Phosphorus causes a significant increase in the production of pro inflammatory cytokines INF-? and TNF-? during the course of infection when compared with the control (p<0.05).The group treated with Phosphorus had 52.5% fewer inflammatory foci in the heart than the control group (p<0.05). The increase of pro inflammatory cytokines in Phosphorus group is related to the significant decrease in the number of inflammatory foci. The effects of a biotherapy produced by chicken serum (Gallus gallus domesticus) at 13cH dilution were tested in mice infected with the protozoan.Gallus gallus domesticus was selected because birds are refractory to T. cruzi infection, being a model of resistance for the infected mice to be treated.In the group treated with 13cH (13cH) chicken serum, 42.31% (n=11) of the animals evaluated survived for more than 2 weeks, whereas in the control group (CI), 25.0% (n=3).The average lifetime (47.3±63.5) days was higher in the 13cH group (p=0.0069) than in the CI group (13.0±3.0).The estimated survival of 13cH was 60.1 days, while CI had a lower average survival of 13.9 days (p=0.0088). Parasitemia and temperature were beneficially affected by the medication for the treated animals, being statistically different (p=0.0023 and p=0.0285) between 13cH and CI (Control). Most of the evaluations in the treated group 13cH presented a behavior closer to the uninfected animals group (CNI), which suggests a better balance of the organism against the infection in the animals treated with highly diluted medication than the observed in the CI group. The infection promotes increase of the cytokines IFN-? and IL-6. In IC they presented increased levels in relation to 13cH. This differential increase suggests that the treatment activates the animal's immune system, but in a balanced way, reducing inflammation and consequently tissue damage. Although 13cH has increased TNF-? among the evaluated times, the treated group presented lower levels compared with CI, promoting activation of the immune system but preventing, however, an exaggerated increase in the levels of this cytokine at the moment of the parasite peak.Thus, there is stimulation in NO production without, however, occurring a drastic increase of this reagent (p>0.05), avoiding tissue damages.This balance was not observed in animals in the CI group, which presented significant and damaging increase of NO, causing earlier death. Correlated behavior between NO and IFN-? on the 8th day after infection (p<0.05) as well as on the 12th day after infection, when IFN-? increased directly proportional to TNF-?, was evidenced in the 13cH group.In conclusion, the results demonstrate: 1) Treatment with Phosphorus13cH promotes beneficial effects on T. cruzi infection in Wistar rats, modulating the secretion of IFN-? and TNF-? with decreased inflammation in cardiac tissue; 2) Treatment of T. cruzi murine infection with highly diluted serum of an animal refractory to this infection presented differentiated modulation of the immune system with alteration of the course of infection and secretion of TNF-?, INF-?, IL6 and NO, providing increased survival and estimated lifetime