Produção de quimeras derivadas da proteína do envelope do Zika vírus com foco no imunodiagnóstico

Abstract

RESUMO: O vírus Zika (ZIKV), pertencente a família Flaviviridae, assim como outros membros dessa família pode ser transmitido pela picada de mosquitos do gênero Aedes. Em 80% dos casos a doença é assintomática. Entretanto, quando os sintomas estão presentes eles se assemelham a casos leves de dengue apresentando febre, dor de cabeça, artralgia, conjuntivite e erupções cutâneas. Outras formas de transmissão foram reportadas como a transmissão sexual, por transfusão sanguínea e materno-fetal tendo essa última alertado para as possíveis complicações neurológicas da doença como a microcefalia congênita e a síndrome de Guillain-Barré. O diagnóstico molecular da infecção geralmente é feito pela detecção do RNA viral. Já o dignóstico sorológico pode ser feito por meio da detecção de anticorpos circulantes contra o vírus. No entanto, a principal limitação encontrada nesse método são as reações cruzadas com anticorpos produzidos por infecções prévias ou vacinação com outros flavivírus. Dessa forma, o objetivo principal desse trabalho foi contribuir com o diagnóstico do Zika vírus por meio do desenvolvimento de um antígeno recombinante específico para esse vírus, baseado em partes da proteína E do envelope viral. Primeiramente, análises in silico foram realizadas e duas regiões foram selecionadas (uma composta de 60 e outra de 30 resíduos de aminoácidos) para construção das proteínas quiméricas e a expressão heteróloga em Escherichia coli BL21 (DE3). Os testes de imunoensaio foram realizados com as proteínas recombinantes purificadas, mostrando que os anticorpos presentes nos soros de pacientes infectados com ZIKV foram capazes de recohecer as quimeras, indicando que esses antígenos podem ser promissores no sorodiagnóstico da doença

ABSTRACT: Zika virus (ZIKV), belonging to Flaviviridae family, as well as other members of this family can be transmitted by mosquitoes bite of the genus Aedes. In 80% of the cases the disease is asymptomatic. However, when symptoms are present they resemble mild cases of dengue with fever, headache, arthralgia, conjunctivitis and rash. Other forms of transmission were reported as sexual, blood transfusion and maternal-fetal being the last one alerted to the possible neurological complications of the disease, such as congenital microcephaly and Guillain-Barré syndrome. Molecular diagnosis is usually done by detecting viral RNA. Serological diagnosis can be done by detecting circulating antibodies against the virus. However, the main limitation regarding this method are the cross-reactions between antibodies produced by previous infections or vaccination with other flaviviruses. Thus the main objective of this work was to contribute to the diagnosis of Zika virus by the development of a specific recombinant antigen for this virus based on parts of the viral envelope protein. First, in silico analyzes were performed and two regions were selected (one composed of 60 and another one composed of 30 amino acids residues) for chimeric protein construction and heterologous expression in Escherichia coli BL21 (DE3). Immunoassay tests were performed with the purified recombinant proteins, showing that the antibodies present in sera from ZIKV infected patients were able to recognize the chimeras, indicating that these antigens may be promising in the serodiagnosis of the disease