Avaliação da atividade da nitrato redutase para detecção rápida de Mycobacterium tuberculosis em culturas de escarro

Abstract

RESUMO: A tuberculose (TB) pulmonar permanece uma ameaça global devido a sua associação com a desnutrição, fatores sócio-econômicos ligados aos aglomerados humanos, imunocomprometimento causado pela co-infecção com HIV e multirresistência aos fármacos utilizados para o tratamento. Logo, o diagnóstico por meio principalmente da cultura é fundamental para a identificação do bacilo, determinação do perfil de suscetibilidade e resposta aos fármacos durante o tratamento. No entanto, o crescimento micobacteriano lento em cultura dificulta o diagnóstico precoce. Neste sentido, ensaios empregando a redução do nitrato têm sido realizados uma vez que a detecção de nitrito é uma característica importante para a diferenciação fenotípica das espécies de micobactérias, principalmente dentro do complexo Mycobacterium tuberculosis para distinguir as espécies que infectam bovinos e humanos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a aplicação de um ensaio modificado, baseado na atividade da enzima nitrato redutase para a detecção de crescimento e identificação de M. tuberculosis em um laboratório de referência. Os resultados obtidos neste estudo estão apresentados no artigo "Fast detection of Mycobacterium tuberculosis culture-positive sputum samples by the nitrate reductase activity". Primeiramente, 55 amostras de escarros foram descontaminadas e semeadas em meios contendo nitrato (Middlebrook 7H9-N, Ogawa Kudoh-N) e sem nitrato (Middlebrook 7H9, Ogawa Kudoh). Em seguida, o crescimento bacteriano foi avaliado por meio da detecção de nitrito proveniente do metabolismo bacteriano, utilizando-se o Reagente de Griess. Os ensaios foram avaliados comparando-os ao sistema Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGITTM ) como método de referência. Os ensaios 7H9-N e OK-N mostraram um melhor desempenho na detecção de M. tuberculosis quando comparado aos ensaios convencionais (7H9 e OK). O desempenho em meio líquido do 7H9-N, foi comparável à do MGITTM na detecção do crescimento de M. tuberculosis. Dessa forma, o ensaio 7H9-N pode ser uma ferramenta auxiliar importante no diagnóstico laboratorial da TB, principalmente em laboratórios com recursos limitados

ABSTRACT: Pulmonary tuberculosis (TB) remains a global threat concerning the association with socioeconomic determinants, human agglomerates, immunocompromised individuals due to HIV coinfection and multidrug resistance. In this sense, diagnosis by culture has a paramount importance, especially for bacillus identification and drug susceptibility profile, however, the delayed growth is a challenge to early diagnosis. Since nitrite is an important feature for mycobacterial identification into Mycobacterium tuberculosis complex (MTC), nitrate reductase assays have been performed to distinguish human from cattle strains. The aim of this study was to evaluate a modified nitrate reductase assay for simultaneous growth detection and identification of M. tuberculosis in a reference center for TB diagnosis. Results were present in the manuscript "Fast detection of Mycobacterium tuberculosis culture- positive sputum samples by the nitrate reductase activity". First, 55 sputum samples were decontaminated and seeded in nitrate added media (Middlebrook 7H9-N, Ogawa Kudoh-N) and without nitrate (Middlebrook 7H9, OK). The growth was followed by the nitrite accumulation, using Griess reagent. In parallel, all assays were conducted in Mycobacteria Growth Indicator Tube System (MGITTM) as reference test. 7H9-N e OK-N showed a better performance during M. tuberculosis detection compared to conventional assays (7H9 e Ogawa Kudoh), which 7H-N present a statistically similar performance to MGITTM regarding its positivity. These findings suggest that in general 7H9-N could be used as an important auxiliary tool for laboratory TB diagnosis in low resource settings