Polimorfismos de genes dos receptores Toll-like em pacientes com neoplasias mieloproliferativas

Abstract

RESUMO: Os receptores Toll-like (TLRs) são uma família de receptores transmembrana responsáveis pela sinalização e indução de citocinas pró-inflamatórias e expressão de moléculas co- estimuladoras, controlando processos celulares de proliferação celular, sobrevivência, apoptose, angiogênese, remodelação e reparo de tecidos. Os polimorfismos nos genes TLRs podem alterar o equilíbrio entre citocinas pró- e anti-inflamatórias, modulando o risco de infecção, inflamação crônica e câncer. Embora muitos estudos tenham demonstrado o envolvimento direto da sinalização TLR em benefício das células tumorais em certos tipos de câncer, pouco se sabe sobre a influência de polimorfismos genéticos destes genes nas neoplasias mieloproliferativas (NMPs). Neste contexto, o objetivo deste estudo foi investigar uma possível associação entre os polimorfismos TLR e o desenvolvimento das NMPs BCR- ABL negativas. Foram avaliados 167 pacientes diagnosticados com NMPs atendidos pelo Hospital do Câncer de Maringá, Instituto do Câncer de Londrina e Laboratório de Diagnóstico Molecular de Doenças Hematológicas da UNICAMP, além de 222 controles saudáveis das mesmas regiões. O DNA genômico foi extraído e as genotipagens dos polimorfismos em TLR2 (rs5743708), TLR4 (rs4986790, rs4986791) e TLR9 (rs5743836, rs187084), assim como, a pesquisa da mutação JAK2V617F foram realizadas por PCR-RFLP. As análises estatísticas foram realizadas pelos programas OpenEpi e SNPStat. Entre os pacientes, 15 (8,98%) foram diagnosticados com mielofibrose (MF), 50 (29,94%) com policitemia vera (PV), 37 (22,16%) com trombocitemia essencial (TE) e 65 (38,92%) com NMP inclassificável. A mutação JAK2V617F esteve presente em 68,32% dos pacientes e a distribuição dos genótipos estava em equilíbrio de Hardy-Weinberg. O genótipo TLR9 - 1486C/T CT foi menos frequente em pacientes com PV (OR=0,39, IC 95%=0,20-0,78, p=0,025) do que em controles. Quando as frequências dos haplótipos foram analisadas, TLR9 -1237T/-1486C foi menos frequente em homens (OR = 0,58, IC 95% = 0,36-0,94), bem como, em pacientes homens JAK negativos (OR=0,43, IC 95%=0,21-0,88). Não houve associação significativa entre os polimorfismos dos genes TLR2 e TLR4, a mutação JAK2V617F e as formas clínicas específicas da doença

ABSTRACT: Toll-like receptors are a family of transmembrane receptors responsible for signaling and induction of pro-inflammatory cytokines and expression of costimulatory molecules, controlling cellular processes of cell proliferation, survival, apoptosis, angiogenesis, remodeling and repair of tissues. Polymorphisms in Toll-like receptor (TLR) genes can change the balance between pro- and anti-inflammatory cytokines, modulating the risk of infection, chronic inflammation and cancer. Although many studies have demonstrated the direct involvement of TLR signaling in the benefit of tumor cells in certain cancers, little is known about the influence of these gene polymorphisms on myeloproliferative neoplasms (MPNs). In this context, the objective of the study was to investigate a possible association between the TLR gene polymorphisms and the development and evolution of BCR-ABL negative MPNs. A total of 167 patients diagnosed with MPNs attended by Cancer Hospital of Maringa, Cancer Institute of Londrina, and Laboratory of Molecular Diagnosis of Hematologic Diseases at UNICAMP, and 222 healthy controls from the same region and ethnic group were evaluated. Genomic DNA was extracted and the TLR2 (rs5743708), TLR4 (rs4986790, rs4986791) and TLR9 (rs5743836, rs187084) polymorphisms, as well as, JAK2V617F genotyping were performed by PCR-RFLP. The statistical analysis was performed by OpenEpi and SNPStats programs. Among patients, 15 (8.98%) were diagnosed with myelofibrosis (MF), 50 (29.94%) polycythemia vera (PV), 37 (22.16%) essential thrombocythemia (TE), and 65 (38.92%) were unclassified MPN. The JAK2V617F mutation was found in 68.32% of patients and the genotype distribution was in Hardy-Weinberg equilibrium. TLR9 -1486C/T CT genotype was less frequent in patients with PV (OR=0.39, 95%CI=0.20-0.78, p=0.025) than in controls. When haplotype frequencies were analyzed, TLR9 -1237T/-1486C was less frequent in men (OR=0.58, 95%CI=0.36-0.94), as well as, in JAK negative men patients (OR=0.43, 95%CI=0.21-0.88). There was no significant association between TLR2 and TLR4 gene polymorphisms and MPN, JAK2V617F mutation, and the specific clinical phenotypes