Comportamento de populações mistas Trypanosoma cruzi I e II mantidas em cultivo acelular exponencial e estacionário

Abstract

RESUMO: A presença de mais de uma DTU (Discrete Typing Unit – Unidades de Tipagens Distintas) de Trypanosoma cruzi tem sido relatada em triatomíneos, reservatórios silvestres e humanos, sendo frequente a ocorrência concomitante de T. cruzi I (TcI) e T. cruzi II (TcII). Nesse estudo foi verificado se o cultivo acelular exponencial e estacionário por período de 3 a 15 meses seleciona TcI ou TcII em misturas naturais ou em populações misturadas em diferentes proporções. As cepas 150 (TcI) e 1256 (TcII) nas proporções 10, 25, 50, 75 e 90% e a cepa N10.19 mistura natural de TcI e TcII foram avaliadas pela análise dos genes do RNA ribosomal (rRNA) e da subunidade II da citocromo oxidase (COII). As amostras foram comparadas com os padrões TcI (Sylvio) e TcII (Esmeraldo). Na fase exponencial após 8 meses de cultivo a análise do rRNA de misturas artificiais mostrou a presença de TcII em todas as proporções e de TcI nas proporções TcI/TcII 90/10, 75/25 e 50/50. A análise do gene de COII no mesmo período de cultivo permitiu observar as populações TcI e TcII em todas as proporções como no início do cultivo. No 9º e 12º meses de cultivo a análise de rRNA mostrou a presença de ambas populações apenas na proporção 75/25 (TcI/TcII). Nesses mesmos períodos o comportamento de TcI/TcII avaliado por COII mostrou a presença de ambas populações como no início do cultivo até a proporção 25/75 e uma nítida diminuição de TcI na proporção 10/90. No 15º mês para a análise de rRNA foi observado apenas TcII para todas as proporções e para COII uma diminuição gradativa de TcI nas proporções 90/10 até 25/75, com predomínio de TcII em 10/90. Na fase estacionária a análise do gene rRNA mostrou que estas populações tiveram um comportamento semelhante ao observado na fase exponencial. A análise do gene de COII mostrou que o comportamento dessas populações foi semelhante ao observado para a fase exponencial, porém a diminuição gradativa de TcI iniciou mais tardiamente (12º mês), foi mais acentuada no 15º mês, sem que tenha ocorrido a total predominância de TcII. Para a mistura natural (N10.19) cultivada por 3 meses a análise do gene de rRNA mostrou a presença de apenas TcII, e do gene COII a presença de ambas populações (TcI+TcII), independente das fases de crescimento. Conclui-se que o comportamento das populações mistas artificiais tem relação direta com a proporção de TcI e TcII e com a fase de crescimento. Conclui-se ainda que a manutenção por um período 8 prolongado induziu a predominância de TcII e que a análise de COII é mais adequada do que a do rRNA para o estudo da dinâmica de populações mistas

ABSTRACT: The presence of more than a DTU (Discrete Typing Unit – Unidades de tipagens distintas) of Trypanosoma cruzi has been reported in triatomines, wild reservoirs and humans, with frequent concomitant occurrence of T. cruzi I (TcI) and T. cruzi II (TcII). In this study we verified whether the cultivation acellular exponential and stationary for a period of 3 to 15 months selects TcI or TcII natural mixtures or populations mixed in different proportions. Strains 150 (TcI) and 1256 (TcII) in the proportions 10, 25, 50, 75 and 90% and the N10.19 strain a natural blend of TcI and TcII were evaluated by analysis of ribosomal RNA genes (rRNA) and subunit II of cytochrome oxidase (COII). The samples were compared with the standard TcI (Sylvio) and TcII (Esmeraldo). In the exponential phase after 8 months of cultivation rRNA analysis of artificial mixtures showed the presence of TcII in all proportions and TcI the proportions TcI/TcII 90/10, 75/25 and 50/50. The analysis of the COII gene in the same growing period allowed us to observe the populations TcI and TcII in all proportions as the beginning of culture. At 9th and 12th month of cultivation rRNA analysis showed the presence of both populations only in proportion 75/25 (TcI/TcII). In these same periods the behavior of TcI/TcII evaluated by COII showed the presence of both populations as the beginning of culture until the proportion 25/75 and a sharp decrease TcI in the proportion 10/90. In the 15th month for the analysis of rRNA was observed only TcII all proportions and COII a gradual decrease of TcI in the proportion 90/10 until 25/75, with a predominance of complete TcII in 10/90. In the stationary phase analysis of the rRNA gene showed that these populations had a behavior similar to that observed in the exponential phase. Analysis of gene COII showed that the behavior of these populations was similar to that observed for the exponential phase, but the gradual reduction of TcI began later (12th month) was more pronounced in the 15th month, when it has occurred the total prevalence of TcII. For the natural mixed (N10.19) grown for 3 months rRNA gene analysis showed the presence of only TcII and COII gene the presence of both populations (TcI+TcII), regardless of growth phases. It is concluded that the behavior of artificial mixed populations is directly related to the proportion of TcI and TcII and the growth phase. It is concluded that the continuation for a 10 prolonged period has induced a predominance of TcII and COII analysis is more appropriate than the rRNA to study the dynamics of mixed populations