Caracterização de RHD fraco e parcial por técnicas moleculares em doadores de sangue e medula óssea atendidos pelo Hemocentro Regional de Maringá, Paraná, Sul do Brasil

Abstract

RESUMO: O sistema de grupo sanguíneo Rh (ISBT 004) é altamente imunogênico. A sua identificação é muito importante na medicina transfusional, devido à aloimunização em transfusões incompatíveis e envolvimento na doença hemolítica perinatal. Mutações no gene RHD conduzem a alterações qualitativas e quantitativas na expressão do antígeno RhD, culminando na formação de fenótipos variantes. O fenótipo RhD fraco ocorre em função da redução da expressão do antígeno RhD na superfície dos eritrócitos, enquanto que, o fenótipo RhD parcial manifesta-se como conseqüência de alterações em aminoácidos extracelulares, que levam a formação de novos epítopos. Por seu importante papel em suprir as limitações sorológicas e consequentemente por auxiliar na escolha das estratégias transfusionais, o conhecimento das freqüências das variantes RhD tornou-se um importante aliado na clínica. O objetivo desse trabalho foi a determinação de variantes RHD parcial e fraco em uma população do Sul do Brasil, por técnicas de biologia molecular. Amostras do sangue periférico de 400 voluntários, doadores de sangue e de medula óssea atendidos pelo Hemocentro Regional de Maringá, foram coletadas com EDTA, após assinatura de termo de consentimento. O DNA foi extraído por meio dos kits comerciais EZ-DNA (Biological IndustriesTM) ou QIAamp® DNA Blood Mini Kit (Qiagen). Apenas as amostras genotipadas como RHD positivas foram utilizadas para a pesquisa das variantes RhD. A genotipagem das variantes de RHD foi realizada de acordo com protocolos previamente descritos (PCR- AS, PCR-M, PCR-RFLP). As freqüências genotípicas foram obtidas por contagem direta. A distribuição dos genes encontrou-se em equilíbrio de Hardy-Weimberg. Das amostras RHD positivas, RHD*fraco tipo 1 e RHD*fraco tipo 2 foram encontradas em 0,29%, RHD*fraco tipo 3 em 1,74% e RHD*fraco tipo 4 em 2,3%. A variante RhD parcial categoria DIVa, RHD*DIV.I, esteve presente em 0,29% das amostras e a variante parcial DVa, RHD*V.1 em 0,58%. A distribuição das frequências de RHD na população avaliada foi caracterizada. A genotipagem foi uma ferramenta útil para a avaliação de variantes RHD.

ABSTRACT: The Rh blood group system (ISBT 004) is high immunogenic. Anti-D remains the leading cause of hemolytic disease of the newborn and of alloimmunization due to transfusion. The large number of alleles of RHD accounts for the diversity of RhD variant phenotypes, which show quantitative and qualitative variations. The weak D phenotype was generally considered to comprise samples with a reduced number of D antigens per RBC without apparent lack of D epitopes. RBCs with partial D are primarily due to inherance of hybrid genes, which results in loss of some epitopes and can generate antigens. To improve routine D typing and define transfusion strategy, it is important to establish the frequency of D variants. The aim of this work was to establish the RHD weak and partial frequencies in a population from Paraná, Brazil. After signing informed consent terms, peripheral blood was randomly collected from 400 voluntary blood and bone marrow donors from Maringá, in the Northwest of Paraná State. The DNA extraction was done by EZ-DNA (Biological IndustriesTM) and QIAamp® DNA Blood Mini Kit (Qiagen). Only positives RHD were used to investigad variants RHD. Genotyping of the variants of RHD was performed according to the protocol previously described (PCR-AS, PCR-M, PCR-RFLP). The genotypic and allelic frequencies were obtained by direct counting. An estimative of the distribution of the RHD gene frequency was in Hardy-Weinberg equilibrium. Of the total samples analyzed, weak RHD* type 1 and RH*D type 2 were 0.29%, RHD*type 3 was 1.74% and RHD*type 4 was 2.32%. Partial RHD*DVI was 0.29% of the samples and RHD*V.I was 0.58%. The frequencies were caracterized. The genotyping may offer a valuable tool for the evaluation of variants RHD