Atividade leishmanicida e imunomoduladora de chalconas sintéticas sobre macrófagos murinos infectados com Leishmania braziliensis

Abstract

RESUMO: As leishmanioses, causadas por protozoários do gênero Leishmania, são consideradas um importante problema de saúde publica, afetando cerca de 1,3 milhões de indivíduos no mundo, e sendo responsável por mais de 25 mil mortes anuais. Considerando as dificuldades no tratamento e a busca de novos agentes leishmanicidas, o presente trabalho tem por objetivo avaliar os mecanismos imunomoduladores envolvidos na resposta de macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c fêmeas, infectados com o protozoário Leishmania, tratados com três chalconas sintéticas (LH-1, IV-5 e LCH-3). Os macrófagos foram infectados com Leishmania (Viannia) braziliensis e tratados com as chalconas antes e depois da infecção, seguindo o IC50 de cada substância. O RNA total foi extraído a partir dos macrófagos incubados pelo tempo de 3, 6 e 24 horas e em seguida avaliado a expressão do RNAm das seguintes citocinas: TNF-?, IL-1?, IFN-?, IL-18, IL-10, IL-12, e da enzima óxido nítrico sintetase induzível (iNOS), por meio da reação em cadeia da polimerase-transcriptase reversa (RT-PCR). A produção de nitrito (NO2) foi avaliada nos sobrenadantes das culturas de células e quantificada através do método de Griess. Os resultados demonstraram que após 3 horas de incubação, as chalconas sintéticas analisadas possuem atividade sobre macrófagos levando a expressão de iNOS e IFN-?, reduzindo a expressão de citocinas pró-inflamatórias como TNF- ? e IL-1? e modulando a expressão de IL-10. As chalconas reduziram o índice de infecção de macrófagos, tanto em macrófagos infectados com L. braziliensis e posteriormente tratados, como em macrófagos tratados e posteriormente infectados com L. braziliensis, e reduziram principalmente a expressão de IL-12. Não houve a produção de nitrito pelos macrófagos. Estes resultados mostram que a atividade das chalconas estudadas sobre o sistema imune parece ser pequena devendo sua atividade leishmanicida ser dar por outros mecanismos. Como os resultados dos índices de infecção foram mais homogêneos nos macrófagos infectados e tratados e associados à redução da expressão de IL-12, acreditamos que este efeito seja devido à ação direta das chalconas sobre o parasito antes que sobre o macrófago. Outros estudos devem ser realizados no sentido de mostrar o benefício da terapia com as chalconas LH-1, LCH-3 e IV-5 nas leishmanioses e definir se estas chalconas apresentam efeitos imunomoduladores

ABSTRACT: Leishmaniasis, caused by protozoa of the genus Leishmania, are considered an important public health problem, affecting about 1.3 million people worldwide, and is responsible for over 25 thousand deaths annually. Considering the difficulties in treatment and the search for new antileishmanial agents, the present study aims to evaluate the immunoregulatory mechanisms involved in the response of peritoneal macrophages from BALB/c mice infected with Leishmania protozoan treated with three synthetic chalcones (LH-1, IV-5 and LCH-3). The macrophages were infected with Leishmania (Viannia) braziliensis and treated with chalcones before and after infection, the following IC50 of each substance. Total RNA was extracted from macrophages incubated at time 3, 6 and 24 hours and then evaluated mRNA expression of the following cytokines: TNF-?, IL-1?, IFN-?, IL-18, IL-10, IL-12, and inducible nitric oxide synthase (iNOS), through reaction of reverse-transcriptase polymerase (RT- PCR). Production of nitrite (NO2) was measured in the supernatants of the cell cultures and quantified using the Griess method. The results showed that after 3 hours of incubation, the synthetic chalcones have analyzed the activity of macrophages leading to expression of iNOS and IFN- ? by reducing the expression of pro-inflammatory cytokines such as TNF-? and IL-1? and IL-10 modulating expression. The chalcones reduced the infection rate of macrophages in both macrophages infected with L. braziliensis and further processed as in macrophages treated and subsequently infected with L. braziliensis, and especially reduced the expression of IL-12. There was also the nitrite production by macrophages. These results show that the activity of chalcones studied on the immune system appears to be small and should be giving their leishmanicidal activity by other mechanisms. As the results in infection rates were more homogeneous in infected and treated macrophages and associated with reduced expression of IL-12, we believe that this effect is due to the direct action of chalcones on the parasite before it on the macrophage. Other studies should be conducted in order to show the benefit of therapy with LH-1, IV-5 and LCH-3 chalcones in leishmaniasis and define whether these chalcones have immunomodulatory effects