Caracterização Genotípica de Streptococcus pneumoniae isolados de crianças da cidade de Umuarama - PR

Abstract

RESUMO: Streptococcus pneumoniae coloniza a mucosa da naso e orofaringe de crianças saudáveis, principalmente de populações de países em desenvolvimento, onde as taxas de portadores geralmente são duas a três vezes maiores que aquelas encontradas entre crianças de países industrializados. No Brasil a taxa de colonização varia de 30 a 50%, e, em nosso meio, e também no mundo, a incidência de pneumococos resistentes a penicilina vem aumentando. O presente estudo teve como objetivo caracterizar genotipicamente 70 amostras de S. pneumoniae isoladas da nasofaringe de crianças sadias atendidas em creches municipais na cidade de Umuarama-PR, avaliar a similaridade genética das amostras e estudar o envolvimento das proteínas ligadoras de penicilna (PBPs) no mecanismo de resistência a penicilina apresentada por algumas das amostras isoladas. A identificação das amostras previamente caracterizadas por métodos fenotípicos (sensibilidade à optoquina e bile solubilidade) foi confirmada pela pesquisa de Lyt A através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e a tipagem molecular de todas as amostras foi realizada pela técnica de gel eletroforese em campo pulsado (PFGE). A caracterização genotípica da resistência a penicilina foi realizada por PCR, na pesquisa dos genes para expressão das PBPs 1a, 2b e 2x. Para todas as amostras, a concentração inibitória mínima da penicilina, previamente determinada por Etest, foi utilizada para associar a pesquisa das PBPs com a resistência a penicilina. As 70 amostras estudadas confirmaram a identificação como S. pneumoniae pela expressão do gene lyt A. Os resultados da tipagem por PFGE demonstraram uma variabilidade de 17 clones, entre os quais, o clone L com 15 (21%) amostras, seguido pelo clone N com 14 (20%), clones A e J com 8 (11,4%), clone K com 6 (8,5%), clone G com 4 (5,7%), clones B, C, E, e Q com 2 (2,8%), e os clones D, F, H, I, M, O e P com 1 (1,4%) amostra cada. Com exceção de duas amostras sensíveis a penicilina, todas expressaram a PBP 2x e 2b. As amostras com resistência intermediária expressaram a PBP 2x e as amostras resistentes não expressaram nenhuma PBP

ABSTRACT: Streptococcus pneumoniae colonizes the mucous membrane of the nasal and oropharynx of healthy children, especially in populations of developing countries, where carrier rates are usually two to three times higher than those found among children in industrialized countries. In Brazil, the colonization rate ranges from 30 to 50%, and among us and also around the world, the incidental occurrence of penicillin-resistant pneumococci is increasing. This paper aimed to characterize genotypically 70 samples of S. pneumoniae isolated from the nasopharynx of healthy children enrolled in a daycare in Umuarama-PR, evaluate the genetic similarity of the samples and study the involvement of the Penicillin Binding Proteins (PBPs) in the penicillin mechanism of resistance presented by some isolated samples. The identification of the samples previously characterized by phenotypic methods (optochin sensitivity and bile solubility) was confirmed by Lyt A research gene detected through PCR and the molecular typing of all samples was performed by Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). The genotypic characterization of resistance to penicillin was performed by PCR, in research of genes for expression of PBPs 1a, 2b and 2x. For all samples, the minimum inhibitory concentration of penicillin (MIC), previously determined by the Etest was utilized to join the PBPs research with the resistance to penicillin. All of the 70 samples analyzed, confirmed the identification as S. pneumoniae by the gene expression Lyt A. The results of typing by PFGE demonstrated a variance of 17 clones, including, the clone L with 15 (21%) samples, followed by clone N with 14 (20%), clones A and J 8 (11.4% ), clone K with 6 (8.5%), clone G with 4 (5.7%), clones B, C, E, and Q 2 (2.8%), and clones D, F, H , I, M, O and P with 1 (1.4%) sample each. With the exception of two sensitive samples to penicillin, all expressed PBP 2x and 2b. Samples with intermediate resistance expressed PBP 2x, and the resistant samples did not express any PBP