Metabólitos de Fusarium oxysporum causam mudanças estruturais e no espalhamento Raman em ratos imunocompetentes

Abstract

RESUMO: Os metabólitos secundários produzidos por Fusarium contaminam os grãos dos cereais e causam doenças e morte nos animais que as consomem, podendo produzir resposta biológica, mesmo na ausência do microorganismo. O gênero Fusarium também tem sido identificado como causador de infecções cutâneas em humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão das citocinas IL-6, TNF-? e TGF-?1 e associar sua expressão com os achados histopatológicos e com as análises físico-químicas via espectroscopia FT-Raman, na pele de ratos imunocompetentes, após a administração intradérmica do extrato bruto de Fusarium oxysporum. Os animais receberam uma aplicação intradérmica de 50 ?L do extrato bruto de F. oxysporum na concentração de 0,5mg/mL, os controles receberam o mesmo volume de solução salina. Após 3, 6, 12 e 24 horas os animais foram mortos e amostras de pele foram obtidas e preparadas para coloração de HE (hematoxilina e eosina), para estudo histopatológico e coloração imunohistoquímica para detectar IL-6, TNF-? e TGF-?1. A resposta inflamatória foi quantificada por meio da atividade da enzima mieloperoxidase. Análises físico-químicas da pele foram realizadas via FT-Raman. Após a aplicação do extrato bruto, a resposta inflamatória foi mais intensa as 6 e 12 horas e as alterações histopatológicas mais relevantes foram observadas na região da derme. A atividade da mieloperoxidase foi intensa das 3 até as 24 horas. A maior expressão das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF-? ocorreram às 6 horas. A imunocoloração para TGF-?1 foi maior as 12 e 24 horas. Na análise físico-química, as diferenças espectrais mais relevantes ocorreram às 6 horas. Os resultados deste trabalho demonstraram que os metabólitos secundários estimularam, mesmo na ausência do fungo, alterações histopatológicas e resposta inflamatória, com aumento na atividade da mieloperoxidase e na expressão de citocinas pró-inflamatórias além de importantes alterações físico-químicas

ABSTRACT: The secondary metabolites produced by Fusarium contaminate cereal grains and cause disease and death in animals that consume it and they can produce biological response, even in the absence of the microorganism. The Fusarium has also been identified as a cause of skin infections in humans. The purpose of this study was to evaluate the expression of the cytokines IL-6, TNF-? and TGF-?1 and associating their expression with histopathological findings and the physical-chemical analysis via FT-Raman spectroscopy in the skin of immunocompetent mice after intradermal administration of the crude extract of Fusarium oxysporum. The animals received an intradermal injection of 50 ?l of crude extract from F. oxysporum at a concentration of 0.5mg/ml, the controls received the same volume of saline. After 3, 6, 12 and 24 hours the animals were killed and skin samples were obtained and prepared for HE (hematoxylin and eosin) staining for histological analysis and immunohistochemical staining to detect IL-6, TNF-? and TGF-?1. The inflammatory response was quantified by enzyme myeloperoxidase activity. Physical and chemical analysis of the skin were performed via FT-Raman. After application of the crude extract, the inflammatory response was most intense 6 and 12 hours, and the most significant histopathological changes were observed in the dermis region. The myeloperoxidase activity was intense in 3 to 24 hours. The increased expression of pro-inflammatory cytokines IL-6 and TNF-? occurred 6 hours. Immunostaining for TGF-?1 was higher 12 and 24 hours. In physical-chemical analysis, the most relevant spectral differences occurred at 6. The results of this study showed that the secondary metabolites stimulated histopathological changes and inflammatory response, even in the absence of the fungus, with increase in myeloperoxidase activity and expression of pro-inflammatory cytokines as well as important physicochemical changes