Mutação do gene p53 nos exons de 5 à 8 em mulheres HIV e HPV positivas : um estudo caso-controle

Abstract

RESUMO: Mulheres HIV-infectadas apresentam maiores chances de desenvolver neoplasia intra-epitelial cervical, causada pelo Papillomavirus Humano (HPV). Quando infectadas por este vírus, as células escamosas cervicais sofrem transformações na expressão gênica e função. Estudos sobre carcinogênese baseiam-se em investigações de marcadores tumorais, principalmente que existam somente na presença do tumor. Neste contexto encontram-se os estudos do gene p53, que possui papel fundamental no controle do ciclo celular e apoptose, que é frequentemente afetado na maioria dos cânceres humanos. O conhecimento dos mecanismos de ação do gene p53 representa uma etapa fundamental para a compreensão dos aspectos biológicos envolvidos na progressão das lesões cervicais. A mutação do gene p53 é frequentemente encontrado nas neoplasias ocorrendo principalmente entre os éxons 5 à 8 e resultam na transcrição de uma proteína p53 não funcional. O estudo incluiu 83 mulheres HIV-infectadas e 37 HIV-não infectadas (grupo controle), do banco de amostras do laboratório de Citologia Clínica - UEM/Brasil. Essas amostras foram genotipadas para determinação do potencial oncogênico através da técnica de PCR-RFLP (restriction fragmente lenght polymorfism) e a análise de mutação nos exons 5 à 8 do gene p53 através da técnica de PCR-SSCP (single strand conformational polimorphism). O grupo HIV apresentou maior faixa etária (40,9 anos) do que o grupo controle (37,5 anos). O HPV de alto risco (HPV-AR) mais frequente no grupo HIV foi o 51, seguido pelo 56, e no grupo controle foi o 58, seguido por outros. O total de mutações do p53 foi 19,28% no grupo HIV e 18,92 no grupo controle. O HPV-AR esteve presente em todas as amostras que apresentaram mutação. O exon que apresentou maior frequência de mutação no grupo HIV foi o exon 7, em citologia normal (31,25%), seguido por lesão de baixo grau (LSIL) e lesão de alto grau (HSIL) (6,25% para ambos). No grupo controle, o exon 6 foi o mais mutado (57,2%), em citologia normal e LSIL (28,58% cada). A PCR mostrou-se um método efetivo para analisar a mutação dos exons 5 à 8 do gene p53, porém, a mutação foi similar nos dois grupos, incluindo citologia normal e lesões. Embora o exon 7 tenha sido o mais mutado no grupo HIV e o exon 6 no grupo controle, esta análise não distingue as mulheres HIV-infectadas que apresentam maior propensão para a progressão de lesões cervicais

ABSTRACT: HIV-infected women have show higher chances to developing intraepithelial cervical neoplasia caused by Human Papillomavirus (HPV). When she was infected by this virus, the scamous cervical cells had transformations in their gene expression and function. Carcinogenesis studies based on investigation of tumor markers particularly those that exist in tumor presence. In this respect, are studies of the p53 gene, which has a fundamental role in controlling cell cycle and apoptosis that is often affected in human cancers. Knowledge of the mechanisms of action of the p53 gene is a fundamental step to understanding the biological aspects involved in the progression of cervical lesions. A mutation of the p53 gene is frequently found in neoplasias, mainly between exons 5 to 8 and results in the transcription of a p53 protein nonfunctional. Cross-sectional study with samples from, 83 HIV-infected women and 37 HIV-uninfected (control group), of the database samples from Clinical Cytology Laboratory - UEM / Brazil. Samples were genotyped for determine the oncogenic potential by PCR-RFLP (restriction fragment lenght polymorfism) and mutation analysis of exons 5 to 8 of the p53 gene by PCR-SSCP (single strand conformational polymorphism). The HIV-infected group had higher age (40.9 years) than the control group (37.5 years). The high-risk HPV (HPV-HR) more frequent in HIV-infected group was 51, followed by 56, and the control group was 58, followed by others. The total p53 mutations was 19.28% in the HIV group and 18.92 in the control group. HR-HPV was present in all samples with mutation. The exon that showed a higher frequency of mutation in HIV-infected group was exon 7 in normal cytology (31.25%), followed by low-grade lesion (LSIL) and high-grade lesion (HSIL) (6.25% for both). In the control group, the exon 6 was the most mutated (57.2%) in normal and LSIL cytology (28.58% each). The CRP was an effective method to analyze the mutation of exons 5 to 8 of the p53 gene, but the mutation was similar in both groups, including normal cytology and lesions. Although the exon 7 has been the most mutated in the HIV-infected group and exon 6 in the control group, this analysis does not distinguish between HIV- infected women who had a higher propensity for progression of cervical lesions