Avaliação da atividade anti-Leishmania (Leishmania) amazonensis de Calophyllum brasiliense e a modulação da expressão de citocinas e de iNOS

Abstract

RESUMO: As leishmanioses acometem 12 milhões de pessoas no mundo e há 350 milhões de indivíduos em risco de contrair a doença. Não existe, porém, um medicamento eficaz anti-Leishmania, que combine custos acessíveis e menor toxicidade ao paciente. Portanto, novos compostos como extrato de Calophyllum brasiliense, planta nativa das florestas tropicais brasileiras, tem despertado o interesse científico devido às suas potenciais atividades leishmanicidas. O presente estudo teve por objetivo analisar a atividade leishmanicida e imunomodulatória do extrato de C. brasiliense em macrófagos infectados com L. (L.) amazonensis. Foram utilizados macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c infectados com L. (L.) amazonensis e, posteriormente, desafiados com extrato hidroalcoólico de C. brasiliense na concentração inibitória de 50% (IC50: 30 ?g/mL). Concomitantemente, culturas de macrófagos foram primeiro tratadas com o extrato vegetal e depois infectadas com L. (L.) amazonensis. O RNA total dos macrófagos incubados foi extraído com reagente TRIzol®, posteriormente transcrito em DNA de fita simples e o mRNA analisado por técnica de RT- PCR. Foi realizada a avaliação semi-quantitativa da intensidade das bandas dos géis, por meio das imagens capturadas pelo sistema de fotodocumentação L-PIX CHEMI e examinadas pelo software Image J®. Os resultados sugerem que o extrato hidroalcoólico de C. brasiliense, na concentração analisada, apresenta atividade leishmanicida, porém modula a resposta imune em macrófagos peritoneais de camundongos, infectados ou não com L. (L.) amazonensis, no sentido de inibir e/ou reduzir a expressão de mRNA das citocinas relacionadas às respostas imunes inata e celular tipo Th1, componentes típicos de uma resposta efetiva para eliminação do parasito

ABSTRACT: Leishmaniasis affect 12 million people worldwide and there are 350 million people at risk of contracting the disease. However, there is no effective anti-Leishmania drug that combines affordable costs and low toxicity to the patient. Therefore, new compounds like Calophyllum brasiliense extract, native plant of the Brazilian rainforests, have drawn scientific attention because of its potential antileishmanial activities. The present study aimed to analyze the antileishmanial and immunomodulatory activity of C. brasiliense extract in Leishmania (L.) amazonensis infected macrophages. Peritoneal macrophages from BALB/c mice infected with L. (L.) amazonensis and subsequently challenged with hydroalcoholic extract of C. brasiliense 50) were used. Concomitantly, macrophage cultures were first treated with the plant extract and then infected with L. (L.) amazonensis. Total RNA was extracted from macrophages with TRIzol® Reagent and subsequently transcribed into single stranded DNA and mRNA analyzed by RT-PCR. The semi- quantitative evaluation of the intensity of the bands from the gels captured by a photodocumentation system PIX CHEMI L and evaluated using Image J software ® images was performed. The results suggest that the hydroalcoholic extract of C. brasiliense at the concentration analyzed, has anti-Leishmania activity but modulates the immune response of peritoneal macrophages of mice infected with or without L. (L.) amazonensis, inhibiting and/or reducing the expression of mRNA related to the innate cellular immune responses and Th1 type cytokines; typical components of an effective response to elimination of the parasite