Desenvolvimento e validação de método para análise de drogas de abuso em fluído oral humano

Abstract

RESUMO: O uso de drogas de abuso é considerado um importante problema de saúde pública global, que implica em diversas consequências sociais e de riscos à saúde da população. As análises toxicológicas, com finalidades clínicas ou forenses, são cruciais para atendimento direcionado e específico aos pacientes e questões em âmbito judicial, em casos de uso abusivo de drogas. A escolha da matriz biológica em conjunto com a técnica de preparo da amostra aliada ao método cromatográfico são etapas críticas e que precisam ser bem definidas, para posterior desenvolvimento, otimização e validação de metodologia. Assim, será possível identificar e quantificar os analitos de interesse com seletividade e sensibilidade adequado. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi atualizar o conhecimento sobre a análise de drogas de abuso em matrizes biológicas e desenvolver, otimizar e validar uma metodologia analítica para identificação e quantificação de cocaína, heroína e produtos de biotransformação em amostra biológica fluido oral (FO). Os resultados foram apresentados em dois artigos: O primeiro, intitulado "Drugs of abuse: A narrative review of recent trends in biological sample preparation and chromatographic techniques" foi publicado no periódico Forensic Chemistry e relatou as metodologias de análises forenses (preparo de amostra e análise cromatográfica) de drogas de abuso em diferentes amostras como sangue, urina, cabelo, ossos, FO e outros. Este, consistiu de uma revisão que se discutiu as várias técnicas de preparo de amostra empregadas entre os anos de 2015-2020, concentrações dos analitos em amostras biológicas convencionais e alternativas e características de análises cromatográficas e espectrometria de massas. O segundo artigo, intitulado "Ultrasound-Assisted Dispersive Liquid-Liquid Microextraction (UA-DLLME) for preconcentration of illicit drugs from oral fluid" apresentou o desenvolvimento e otimização da metodologia miniaturizada utilizando planejamento multifatorial com auxílio de ferramentas quimiométricas. Neste, após desenvolvimento, a técnica UA-DLLME-GC-MS foi validada e aplicada em amostras autênticas de FO, identificando e quantificando analitos como cocaína, benzoilecgonina e cocaetileno (ambos produtos de biotransformação), comprovando o uso recente da droga. A partir dos resultados obtidos, podemos concluir que, a metodologia de análise toxicológica é desafiadora e deve ser escolhida pelo toxicologista com atenção a diversos fatores, como o propósito da análise, características do analito, viabilidade da amostra e disponibilidade das técnicas analíticas. Ademais, um adequado planejamento multifatorial da metodologia é importante para garantir condições ótimas para extração dos analitos, com menor número de análises e consequentemente menor custo para desenvolvimento e otimização

ABSTRACT: The use of drugs of abuse is considered a major global public health problem, which implies several social consequences and risks to the health of the population. Toxicological analyses, for clinical or forensic purposes, are crucial for targeted and specific care towards patients and issues in the judicial sphere, in cases of drug abuse. The choice of the biological matrix, along with the sample preparation technique coupled with the chromatographic method, are critical steps that need to be well defined for further development, optimization and validation of the methodology. Thus, it will be possible to identify and quantify the analytes of interest with appropriate selectivity and sensitivity. Thus, the objective of this work was to update the knowledge on the analysis of drugs of abuse in biological matrices and to develop, optimize and validate an analytical methodology for the identification and quantification of cocaine, heroin and biotransformation products in oral fluid (OF) biological samples. Results were presented in two articles. The first, titled "Drugs of abuse: A narrative review of recent trends in biological sample preparation and chromatographic techniques" was published in the journal Forensic Chemistry and reported on the methodologies of forensic analysis (sample preparation and chromatographic analysis) of drugs of abuse in different samples such as blood, urine, hair, bones, OF and others. It consisted of a review that discussed the various sample preparation techniques employed between the years 2015-2020, analyte concentrations in conventional and alternative biological samples, and characteristics of chromatographic analysis and mass spectrometry. The second article, titled " Ultrasound-Assisted Dispersive Liquid-Liquid Microextraction (UA-DLLME) for preconcentration of illicit drugs from oral fluid" presented the development and optimization of the miniaturized methodology using multifactorial design with the aid of chemometric tools. In that study, post development, the UA-DLLME-GC-MS technique was validated and applied to authentic OF samples, identifying and quantifying analytes such as cocaine, benzoylecgonine and cocaethylene (both biotransformation products), proving the recent use of the drug. From the results obtained, we can conclude that the methodology of toxicological analysis is challenging and should be chosen by the toxicologist with attention to several factors, such as the purpose of the analysis, characteristics of the analyte, viability of the sample and availability of analytical techniques. In addition, adequate multifactorial planning of the methodology is important in ensuring optimal conditions for analyte extraction, with a smaller number of analyses and, consequently, lower costs for development and optimization