Enterobactérias resistentes aos carbapenêmicos em hospitais públicos do Sul do Brasil : detecção fenotípica e molecular de carbapenemases

Abstract

RESUMO: A ocorrência de infecções causadas por enterobactérias resistentes aos carbapenêmicos (ERC) e o constante aumento de isolados produtores de carbapenemases representam um grave problema de saúde pública. O objetivo deste estudo foi realizar a detecção de enterobactérias produtoras de carbapenemases (EPC) em isolados clínicos e de culturas de vigilância positivas para ERC, provenientes de pacientes internados em dois Hospitais Públicos do Sul do Brasil (Hospital A e B) durante um período de 5 anos (2011 – 2015). Foram realizados métodos fenotípicos (teste de hodge modificado – THM e teste com inibidores enzimáticos) e foi calculado o desempenho de cada método. Para avaliar a similaridade genética entre os isolados foi utilizada a técnica de ERIC-PCR. Diferentes técnicas de PCR e sequenciamento foram utilizadas para detecção dos genes de carbapenemases blaKPC, blaOXA-48, blaNDM, blaVIM, blaSIM, blaGIM, blaSPM e blaIMP. Os resultados deste trabalho foram apresentados no capítulo II em forma de manuscritos intitulados: "Disseminação policlonal de enterobactérias resistentes aos carbapenêmicos e incidência de produtores de KPC em hospitais do Sul do Brasil" e "Sensibilidade e especificidade de dois métodos fenotípicos para detecção de carbapenemases em isolados de Enterobacteriaceae resistentes a carbapenêmicos". Foram incluídas neste estudo 223 ERC (153 Klebsiella pneumoniae, 42 Enterobacter cloacae, 18 Escherichia coli e 10 K. oxytoca). Detectamos através de teste fenotípicos e moleculares 24 enterobactérias produtoras de carbapenemase do tipo KPC-2, representando um percentual de 11% do total de Enterobacteriaceae. A sensibilidade e especificidade do THM e teste com inibidor enzimático para detecção de carbapenemases foram de 100% e 92%, 100% e 97%, respectivamente. Foram detectados 44 clusters entre os isolados de K. pneumoniae e 24 em isolados de E. cloacae, 17 clusters (13 K. pneumoniae e 4 E. cloacae) foram detectados nos dois hospitais. Dos isolados produtores de carbapenemases, 83% foram provenientes do Hospital B. Foram identificados 6 clusters diferentes entre as amostras de K. pneumoniae produtoras de KPC (KPC-Kp), 2 clusters (I e L) foram responsáveis por 82% dos isolados de KPC-Kp. Em nosso estudo detectamos uma disseminação poli-clonal de ERC e um percentual alarmante de EPC entre isolados de ERC, alertando para necessidade de medidas de controle desses microorganismos

ABSTRACT: The occurrence of infections caused by carbapenem-resistant Enterobacteriaceae (CRE) and the steady increase of carbapenemase-producing strains represent a serious public health problem. From clinical and epidemiological surveillance samples of CRE isolates in a period of 5 years (2011 - 2015) in two Public Hospitals of Southern Brazil, the objective of this study was detect carbapenemase-producing Enterobacteriaceae using phenotypes (Modified Hodge test - MHT and enzyme inhibitors: EDTA, aminophenylboronic acid) and molecular methods (PCR, sequencing), and also calculate the efficiency of phenotypes tests and analyze the distribution of CRE in both Hospitals. Genetic diversity of CRE strains was determined by ERIC-PCR analysis. CRE strains were screened for the presence of genes encoding carbapenemases: blaKPC, blaOXA-48, blaNDM, blaVIM, blaSIM, blaGIM, blaSPM e blaIMP. The results of this study were presented in chapter II as a manuscript entitled "Polyclonal dissemination of carbapenem-resistant Enterobacteriaceae and incidence of KPC producers in hospitals in southern Brazil" and "Sensitive and specific detection of carbapenemase-producing carbapenem resistant enterobacteriaceae with two phenotypic methods". In total, 223 CRE (153 Klebsiella pneumoniae, 42 Enterobacter cloacae, 18 Escherichia coli and 10 Klebsiella oxytoca) were included in this study. We detected by phenotypic and molecular assays 24 (11%) carbapenemase-producing Enterobacteriaceae type KPC-2 (22 K. pneumoniae and 2 E. cloacae). The sensitivity and specificity of MHT were 100% and 92%, respectively, and 100% and 97% for combination disk assay with enzymatic inhibitor AFB. For K. pneumoniae, 44 distinct clusters were detected and 24 clusters were detected in E. cloacae isolates. 17 clusters were found in both Hospitals (13 K. pneumoniae and 4 E. cloacae). Among the 22 samples of K. pneumoniae producing KPC (KPC-Kp), 6 different clusters were identified, however, 82% of the KPC-Kp isolates were predominantly classified into 2 clusters. Two isolates of E. cloacae positive for the blaKPC gene were classified in the same cluster. In our study, we detected a polyclonal spread of CRE and a high percentage of KPC-2 producing Enterobacteriaceae among CRE, alerting the need for measures to contain and control these microorganisms