Monitoramento morfológico e por espectroscopia Raman da pele de ratos após a aplicação intradérmica de uma fração de F. oxysporum

Abstract

RESUMO: Fusarium é um patógeno emergente com alta taxa de morbidade e mortalidade. Importante resposta tecidual é observada nos pacientes infectados e tem sido associada com a produção de metabólitos de ação tóxica. Nosso objetivo foi individualizar a fração majoritária do extrato metabólico bruto de Fusarium oxysporum e investigar seus efeitos na pele de ratos saudáveis. A fração F1 foi obtida por meio do cultivo de F. oxysporum em Czapek-Dox. Nos grupos tratados (n=4 animais/tempo de sacrifício) foi injetado, via intradérmica, fração F1 (0,5 mg / mL) e nos grupos controle (50 ?l) de solução salina 0,9%. Os animais foram sacrificados 3, 6, 12 e 24 horas após a inoculação. A pele foi fixada para inclusão em parafina para obtenção de cortes histológicos e coradas com hematoxilina e eosina, avaliando resposta inflamatória; Sirius red, para a quantificação de colágeno; e TUNEL, para detectar células em apoptose. Uma amostra (n=2 animais/tempo de sacrifício) foi analisada por espectroscopia Raman com transformada de Fourier. As reações teciduais foram classificadas e comparadas ao longo do tempo e tratamento. No grupo tratado a reação inflamatória atingiu um pico em 6 horas sendo classificada como moderada, com o infiltrado formado principalmente por neutrófilos, hiperemia e fibroblastos com morfologia de células ativas. A coloração de TUNEL foi negativa. A área ocupada por colágeno tipo I e III no grupo tratado teve um ganho temporal. Houve alteração na área ocupada por amida I e nas razões das moléculas –CH2 e –CH3. A fração F1 de F. oxysporum não foi capaz de induzir os mesmos eventos biológicos daqueles estudados anteriormente. É plausível supor que a fração contenha elementos que contribuam para a invasão de Fusarium na pele, desestruturando a organização da matriz extracelular

ABSTRACT: Fusarium is an emerging pathogen with high morbidity and mortality. Important tissue response is observed in infected patients and has been associated with the production of metabolites of toxic action. Our goal was to individualize the major fraction of the crude extract of Fusarium oxysporum metabolic and investigate their effects on the skin of healthy mice. The fraction F1 was obtained by the cultivation F. oxysporum in Czapek-Dox. In the treated groups (n = 4 animals / time of sacrifice) was injected intradermally F1 fraction (0.5 mg / mL) and control (50 ?l) of 0.9% saline solution. The animals were sacrificed 3, 6, 12 and 24 hours after inoculation. The skin was set for inclusion in paraffin to prepare histological sections and stained with hematoxylin and eosin, assessing inflammatory response, Sirius red for collagen quantification, and TUNEL to detect apoptotic cells. A sample (n = 2 animals / sacrifice time) was analyzed by Raman spectroscopy with Fourier transform. Tissue reactions were classified and compared over time and treatment. In the group treated inflammatory reaction peaked at 6 hours was classified as moderate, with the infiltrate consisting mainly of neutrophils, hyperemia and morphology of fibroblasts with active cells. TUNEL staining was negative. The area occupied by type I and III collagen in the treated group had a winning time. There were changes in the area occupied by the reasons amide I and molecules -CH2 - CH3. The fraction F1 of F. oxysporum was not able to induce the same biological events of those studied previously. It is plausible that the fraction contains elements that contribute to the invasion of Fusarium in the skin destabilized the organization of the extracellular matrix