Alterações na mucosa e submucsa do íleo de ratos Wistar durante a infecção aguda e crônica por Toxoplasma gondii

Abstract

RESUMO: Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório agente etiológico da toxoplasmose, zoonose com ampla distribuição mundial. Nesta ocorre diarréia acompanhadas de ulcerações intestinais que podem evoluir para ileíte fatal em camundongos susceptíveis. Os ratos são usualmente resistentes à infecção, mas ainda assim pode haver inflamação. O processo inflamatório ocasionado pelo T. gondii na parede intestinal promove um desbalanço de neurotransmissores induzindo a neuroplasticidade que no plexo submucoso podem afetar a integridade do epitélio e a secreção de diferentes substâncias. No primeiro estudo foi observado se as mudanças das subpopulações neuronais do plexo submucoso ocasionadas pela penetração do T. gondii no intestino possuem relação com as células da mucosa do íleo de ratos Wistar durante diferentes tempos da fase aguda. E no segundo trabalho foi analisado se os marcadores da inflamação e da geração do estresse oxidativo e nitrosativo estão relacionados com a infecção aguda e crônica do T. gondii e, se estes são a causa das alterações dos neurônios e das células da glia submucosos do íleo de ratos Wistar. No primeiro estudo foi realizado uma cinética da infecção sendo que os ratos foram distribuídos aleatoriamente em 8 tempos experimentais da fase aguda: um não infectado (GC) e, sete infectados e, no segundo estudo os ratos foram distribuídos em 4 tempos experimentais: um não infectado (GC) e, três infectados tanto da fase aguda como da crônica, sendo que todos os grupos infectados foram inoculados com 5000 oocistos de T. gondii esporulados (cepa ME-49, genótipo II) e eutanasiados. No primeiro trabalho segmentos do íleo foram separados para o processamento histológico, para as técnicas de histoquímica e imunofluorescência para análise dos neurônios submucosos HuC/D-IR, VIP-IR, nNOS-IR e TUNEL. No segundo o íleo foi fragmentado para as análises bioquímicas: quantificação de NO2, GSH e LOOH e, atividade enzimática de SOD, GST e MPO e, análises morfológicas: técnicas de imunofluorescência para estudo dos neurônios submucosos HuC/D-IR, VIP-IR, nNOS-IR, CALR-IR e TUNEL e, das células da glia entérica GFAP e S100. No primeiro trabalho ocorreu perda neuronal progressiva ao longo da infecção na população geral e mudanças fenotípicas das subpopulações estudadas. Além de mudanças na quantificação das células caliciformes AB 2.5+, linfócitos intraepiteliais, células inflamatórias da lâmina própria e fibrogênese na túnica submucosa. Já, no segundo, além das alterações neuronais e gliais submucosas, na análise bioquímica foi observada que os níveis de LOOH, GSH não foram alterados, mas os níveis de NO2- reduziram em todos os grupo experimentais. A atividade enzimática da SOD e GST foram similares ao controle, já a MPO aumentou na somente na fase crônica. A perda neuronal foi por apoptose demonstrada pelo TUNEL. Conclui-se que a infecção aguda pelo T. gondii no íleo de ratos Wistar promove perda e mudanças fenotípicas dos neurônios submucosos que podem estar relacionados as alterações das células epiteliais, de defesa da mucosa intestinal e gliais. Foi encontrado gliose que pode ter sido induzida pela inflamação. As alterações neuronais e gliais no plexo submucoso na fase aguda e crônica não são causadas pelo estresse oxidativo

ABSTRACT: Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite etiological agent of toxoplasmosis, zoonosis with widespread worldwide distribution. In this occurs diarrhea accompanied by intestinal ulcerations that may progress to fatal ileitis in susceptible mice. Rats are usually resistant to infection, but there may still be inflammation. The inflammatory process caused by T. gondii in the intestinal wall promotes an imbalance of neurotransmitters inducing the neuroplasticity that in the submucosal plexus can affect the integrity of the epithelium and the secretion of different substances. In the first study it was observed whether the changes of the submucosal plexus neuronal subpopulations caused by the penetration of T. gondii in the intestine are related to the mucosal cells of the ileum of Wistar rats during different times of the acute phase. And in the second work it was analyzed whether the markers of inflammation and the generation of oxidative and nitrosative stress are related to the acute and chronic infection of T. gondii and, if these are the cause of the alterations of the neurons and the submucosal glial cells of the ileum of Wistar rats. In the first study, infection kinetics were performed, and the rats were randomly distributed in 8 acute experimental times: one uninfected (CG) and seven infected, and in the second study the rats were distributed in 4 experimental times: one (CG), and three infected from both the acute and chronic phases. All infected groups were inoculated with 5000 sporulated T. gondii oocysts (strain ME-49, genotype II) and euthanized. In the first work, segments of the ileum were separated for histological processing, for histochemistry and immunofluorescence techniques for analysis of submucous neurons HuC/D-IR, VIP-IR, nNOS-IR and TUNEL. In the second, the ileum was fragmented for the biochemical analyzes: NO2, GSH and LOOH quantification and SOD, GST and MPO enzymatic activity and morphological analysis: immunofluorescence techniques for the study of submucosal neurons HuC/D-IR, VIP-IR , nNOS-IR, CALR-IR and TUNEL, and GFAP and S100 enteral glial cells. In the first study, there was progressive neuronal loss throughout the infection in the general population and phenotypic changes of the studied subpopulations. In addition to changes in quantification of AB 2.5+ goblet cells, intraepithelial lymphocytes, lamina propria inflammatory cells and fibrogenesis in the submucosal tunica. Already, in the second, besides the submucosal neuronal and glial changes, in the biochemical analysis it was observed that the levels of LOOH, GSH were not altered, but NO2 levels decreased in all experimental groups. The enzymatic activity of SOD and GST was similar to control, whereas MPO increased in only the chronic phase. The neuronal loss was by apoptosis demonstrated by TUNEL. It is concluded that the acute infection by T. gondii in the ileum of Wistar rats promotes loss and phenotypic changes of the submucosal neurons that may be related to changes in epithelial cells, intestinal mucosal defense and glial. Gliosis has been found which may have been induced by inflammation. Neuronal and glial changes in the submucosal plexus in the acute and chronic phase are not caused by oxidative stress