Envolvimento dos receptores de bradicinina tipo 2 e µ-opioide na regulação dos comportamentos defensivos na substância cinzenta periaquedutal dorsal

Abstract

RESUMO: O transtorno do pânico é caracterizado por ataques de pânico recorrentes e repetidos acompanhados de alterações fisiológicas e comportamentais. O sistema serotonérgico e o sistema opioide modulam cooperativamente as respostas de medo (pânico) através da ativação do receptor de serotonina do subtipo 1A (R5-HT1A) e do receptor µ-opioide (MOR) presentes na substância cinzenta periaquedutal dorsal (SCPd), uma região do encéfalo responsável por regular os comportamentos defensivos. Comprovando a participação dos opioides endógenos nas respostas de medo, foi observado que a opiorfina, um inibidor das enzimas endopeptidase neutra (NEP) e a aminopeptidase N (APN), causou efeito tipo panicolítico mediado pelo MOR em ratos, sugerindo que esse efeito foi causado pelo aumento das encefalinas, que ativam esse tipo de receptor opioide. No entanto, devido à falta de seletividade dessas enzimas, outros peptídeos endógenos também poderiam estar sendo ativados como, por exemplo, a bradicinina (BK). Um estudo anterior observou que a administração intra-SCPd de BK causou efeito tipo panicolítico, que foi bloqueado pelo antagonista não seletivo de receptores opioides, a naloxona. Essa foi a primeira evidência mostrando o efeito tipo panicolítico da BK e sua interação com os receptores opioides na SCPd. Nenhum relato foi encontrado sobre a participação do sistema serotonérgico no efeito tipo panicolítico da opiorfina ou da bradicinina. Sendo assim, neste trabalho, investigamos a participação e a interação entre os receptores de BK tipo 2 (RB2), MOR e R5-HT1A na mediação do efeito tipo panicolítico da BK e da opiorfina, usando o modelo de estimulação elétrica (EE) da SCPd em ratos. Nossos resultados mostraram que a injeção intra-SCPd de BK inibiu o comportamento de fuga no teste da EE da SCPd, indicativo de efeito tipo panicolítico. Esse efeito da BK foi bloqueado pelo antagonista seletivo do RB2, o HOE-140, e pelo antagonista seletivo do MOR, o CTOP. Em seguida, foi observado que o efeito tipo panicolítico do agonista seletivo MOR, o DAMGO, foi bloqueado pelo pré-tratamento com o CTOP e pelo HOE-140. Complementarmente, foi observado que a associação de doses inefetivas do agonista seletivo MOR, o DAMGO, e da BK promoveu efeito tipo panicolítico. Esses resultados indicam um sinergismo de efeito e um antagonismo cruzado entre o MOR e o RB2 na SCPd. Além disso, investigamos a participação da BK endógena através da administração intra-SCPd do inibidor da enzima conversora de angiotensina (ECA), o captopril. O captopril causou efeito tipo panicolítico, o qual foi bloqueado pelo HOE-140, sugerindo uma mediação desse efeito pela BK endógena. Na sequência, investigamos a hipótese de que o bloqueio das enzimas NEP e APN pela opiorfina poderia causar um aumento de outros peptídeos, como a BK, e observamos que o antagonista seletivo do RB2 bloqueou o efeito tipo panicolítico da opiorfina e a associação das doses inefetivas da opiorfina e BK promoveu efeito tipo panicolítico. Finalmente, investigamos a participação dos R5-HT1A no efeito tipo panicolítico da opiorfina e da BK. Foi observado que o antagonista seletivo do R5-HT1A, o WAY-100635, não foi capaz de antagonizar o efeito tipo panicolítico, tanto da opiorfina quanto da BK. Além disso, a associação das doses inefetivas do agonista seletivo do R5-HT1A, 8-OH-DPAT, e da opiorfina não promoveu efeito. Concluindo, nossos resultados mostraram que a BK causou efeito tipo panicolítico mediado pelo RB2, que interage sinergicamente com o MOR na SCPd. O efeito tipo panicolítico da opiorfina na SCPd também é mediado pela BK endógena através da ativação do RB2. Por fim, o efeito panicolítico do captopril e da opiorfina desperta o interesse em explorar o uso dos inibidores da ECA e da NEP no tratamento do transtorno do pânico

ABSTRACT: Panic disorder is characterized by recurrent panic attacks accompanied by physiological and behavioral changes. The serotonergic and opioid system cooperatively modulate fear (panic) responses through the activation of the serotonin-1A (5-HT1AR) and µ-opioid (MOR) receptor present in the dorsal periaqueductal gray (dPAG), a region of the brain responsible for regulating defensive behaviors. Proving of the involvement of endogenous opioids in fear responses, was observed that opiorphin, an inhibitor of neutral endopeptidase (NEP) and aminopeptidase N (APN), caused a panicolytic-like effect mediated by MOR in rats, suggesting that this effect was caused by the increase in enkephalins, which activate this type of receptor. However, due to the lack of selectivity of these enzymes, other endogenous peptides could also be activated, such as bradykinin (BK). An early study observed that intra-dPAG administration of BK caused a panicolytic-like effect, which was blocked by the non-selective opioid receptor antagonist, naloxone. This was the first evidence showing the panicolytic-like effect of BK and its interaction with opioids receptors in dPAG. No reports were found on the participation of the serotonergic system in the panicolytic-like effect of opiorphin or BK. Thus, in this work we investigated the participation and interaction between B2-kinin receptor (B2R), MOR and 5-HT1AR in mediating the panicolytic-like effect of BK and opiorphin, using the dPAG electrical stimulation (ES) test in rats. Our results showed that intra-dPAG injection of BK inhibited escape behavior in the dPAG ES test, indicating panicolytic-like effect. This BK effect was blocked by the selective B2R antagonist, HOE-140, and the selective MOR antagonist, CTOP. Then, it was observed that the panicolytic-like effect of the selective MOR agonist, DAMGO, was antagonized by pretreatment with CTOP and HOE-140. In addition, it was observed that the association of ineffective doses of the selective MOR agonist, DAMGO, and BK promoted a panicolytic-like effect. These results indicate an effect synergism and a cross antagonism between MOR and B2R in dPAG. We also investigated the participation of endogenous BK through the intra-dPAG administration of the angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitor, captopril. The Captopril caused panicolytic-like effect that was blocked by HOE-140, suggesting a mediation of this effect by endogenous BK. In the sequence, we investigated the hypothesis that the blockade of the NEP and APN enzymes by opiorphin could cause an increase in other peptides such as BK. We observed that the selective B2R antagonist, HOE 140, blocked the panicolytic-like effect of opiorphin and the combination of the ineffective doses of opiorphin and BK promoted a synergism panicolytic-like effect. Lastly, we investigated the participation of 5-HT1AR in the panicolytic-like effect of opiorphin and BK. It was observed that the selective 5-HT1AR antagonist, WAY-100635, was not able to antagonize the panicolytic-like effect of opiorphin or BK. In addition, the association of ineffective doses of the selective 5-HT1AR agonist, 8-OH-DPAT, and opiorphin did not promote effect. In conclusion, our results showed that BK caused a panicolytic-like effect mediate by B2R, which interacts synergistically with MOR in dPAG. The panicolytic-like effect of opiorphin was also mediated by endogenous BK through the activation of B2R in dPAG. Finally, the panicolytic-like effect of captopril and opiorphin arouses interest in exploring the use of ACE and NEP inhibitors in the treatment of panic disorder