Efeito sinérgico da combinação entre tiossemicarbazona semissintética derivada do limoneno e miltefosina sobre Leishmania amazonensis

Abstract

RESUMO: A leishmaniose é considerada uma doença tropical negligenciada, endêmica em 88 países, disseminada em quatro continentes. A alta toxicidade dos medicamentos disponíveis prejudica a adesão dos pacientes ao tratamento. A terapêutica permanece inalterada por várias décadas, fato que contribui para o desenvolvimento de cepas resistentes a esses fármacos. Análises prévias indicaram atividade antileishmania in vitro do composto sintético 4-nitro benzaldeído tiossemicarbazona derivado do S-(-)limoneno (BZTS). Seguindo a tendência atual de combinação de compostos e buscando uma possível atividade sinérgica, o composto teste BZTS foi combinado a medicamentos já consolidados na terapia antileishmania - anfotericina B e miltefosina. Essas combinações apresentaram perfil sinérgico em relação à atividade contra Leishmania amazonensis. No entanto, estudos de citotoxicidade contra células de mamíferos mostraram perfil sinérgico da combinação com anfotericina B e perfil antagônico da combinação com miltefosina. Dessa forma, apenas os estudos de combinação com miltefosina foram continuados. Os estudos de mecanismo de ação revelaram aumento de inclusões lipídicas e do stress oxidativo nos protozoários tratados com a combinação com miltefosina, além de presença de grande número de vacúolos autofágicos. A citometria de fluxo excluiu a possibilidade de morte celular por necrose, mas não elucidou completamente a hipótese de apoptose. A combinação de compostos estudada mostrou-se eficiente contra os parasitos e ideal do ponto de vista citotóxico

ABSTRACT: Leishmaniasis is considered a neglected tropical disease, endemic in 88 countries and spread in four continents. The high toxicity of the available medicines affects the adherence to treatment, which remains unchanged for several decades. This fact contributes for the development of resistant strains. Previous analyzes indicated that 4-nitro benzaldehyde thiosemicarbazone derived from S-(-)-limonene, a synthetic and innovative compound, presented antileishmania activity in vitro. Following the current trend of drug combination and searching a possible synergistic effect, the test compound was combined with medicines already established in the antileishmania therapy - amphotericin B and miltefosine. These associations showed synergistic activity profile against Leishmania amazonensis. However, cytotoxic studies against mammalian cells presented synergistic profile when combined with amphotericin B and antagonistic profile when associated with miltefosine. Thus, only the miltefosine combination studies were continued. Mechanism of action studies revealed an increase of lipid droplets and oxidative stress in the protozoa treated with miltefosine combination, besides the presence of many autophagic vacuoles. Flow cytometer excluded the possibility of cellular death from necrosis, but it not completely elucidated the apoptosis hypothesis. Drug combination evaluated proved efficient against the parasites and interesting cytotoxic behavior