Atividade antiproliferativa e efeitos sinérgicos de triterpenos naturais e semi-sintéticos e morte celular por autofagia em formas amastigotas de Trypanosoma cruzi

Abstract

RESUMO: A doença de Chagas vêm sendo reconhecida como uma importante antropozoonose emergente frequente na América Latina. Os terpenos, de uma forma geral, são compostos de elevado potencial para o tratamento da doença de Chagas, Leishmaniose e de outras doenças. Um dos compostos triterpênicos estudados são constituídos de uma mistura binária isomérica natural de triterpenos e mais sete análogos também na sua forma isomérica binária. Quatro triterpenos eram isolados naturais. Atividades expressivas foram encontradas em formas amastigotas intracelulares com esses triterpenos, apresentando um IC50 (concentração que inibe 50%) variando de 3,2 a 55,3 µM. No ensaio de citotoxicidade para células LLCMK2 (células de rim de Macaca mulatta) verificou-se que apenas compostos 2 e 9 apresentaram uma alta toxicidade com um CC50 (concentração citotóxica que inibe 50%) de 29,6 e 16,2 µM. O restante dos compostos o CC50 variou de 103,6 a 556,6 µM. Para o ensaio de hemólise utilizando sangue humano tipo A+ com uma dose de 2000 µM a taxa de hemólise variou de 3,4 a 82,4%. Para os ensaios de combinação de drogas, os composto 6 e 1 combinados apresentaram um CI (Índice da combinação) de 0,78 e 1,35 em formas amastigotas de T. cruzi e células LLCMK2, respectivamente. O composto 4 combinado com o benzonidazol apresentou um CI de 0,81 e 1,4 em formas amastigotas de T. cruzi e células LLCMK2, respectivamente. As principais alterações observadas na microscopia eletrônica nas formas amastigotas foram a formação de estruturas intracelulares que sugerem autofagia. Não foram observadas alterações no volume celular e da integridade de membrana dos amastigotas. Entretanto, foram observados alterações no potencial de membrana mitocondrial, principalmente com o tratamento com IC90 dos parasitos. Assim, devido a excelente atividade anti-amastigota desses compostos, os triterpenos testados representam compostos promissores para o tratamento da doença de Chagas

ABSTRACT: Chagas disease have been recognized as an important emerging anthropozoonosis frequent in Latin America. Terpenes, in general, are high potential compounds for the treatment of Chagas disease, leishmaniasis and other diseases. One of triterpene studied compounds are a natural binary isomeric mixture of triterpenes and seven binary analogs are also isomeric form. Four natural triterpenes were isolated. Expressive activities were found in intracellular amastigotes with these triterpenes, exhibiting an IC50 (concentration which inhibits 50%) ranging from 3.2 to 55.3 uM. In the cytotoxicity assay to LLCMK2 cells (kidney cells of Macaca mulatta), only compounds 2 and 9 showed high toxicity with a CC50 (cytotoxic concentration that inhibits 50%) of 29.6 and 16.2 uM. The remaining of the CC50 compounds ranged from 103.6 to 556.6 uM. For the hemolytic assay using human A+ blood type with a dose of 2000 uM hemolysis rate ranged from 3.4 to 82.4%. For the drug combination assays, the compounds 6 and 1 combined displayed a CI (Combination Index) of 0.78 and 1.35 in amastigotes of T. cruzi and LLCMK2 cells, respectively. Compound 4 combined with benznidazole showed a CI 0.81 to 1.4 in amastigotes of T. cruzi and LLCMK2 cells, respectively. The main changes observed in electron microscopy in amastigotes were the formation of intracellular structures that suggest autophagy. No changes were observed in cell volume and membrane integrity of amastigotes. However, changes were observed in mitochondrial membrane potential, especially with treatment with IC90 of parasites. Thus, due to the excellent anti-amastigote activity of these compounds, the triterpenes tested represent promising compounds for the treatment of Chagas disease