Atividade anti-inflamatória do tirosol e derivados salicilatos obtidos por modificações moleculares

Abstract

RESUMO: Modificações moleculares são promissoras, entre as várias formas utilizadas para introduzir novas drogas terapêuticas. Sendo assim, esta pesquisa envolveu modificações moleculares do tirosol, produzindo novos derivados salicilatos, com o objetivo de avaliar seus efeitos anti-inflamatórios em modelos experimentais de resposta aguda, além de modelos experimentais in vitro para observar a migração de neutrófilos e atividad e antioxidante. A primeira modificação consistiu na introdução de um grupo áci do carboxílico adjacente em um dos grupos fenólicos, criando o derivado (1), salicilat o. Outra modificação consistiu na acetilação de outro grupo fenólico produzindo assim o derivado (2), acetilsalicilato. Foi possível obter intermediários de reações isolados e purificados, com bons rendimentos na maioria das reações, além de apresentarem suas estruturas quími cas identificadas e comprovadas por ressonância magnética nuclear de prótons e carbono, nas etapas limitantes da rota sintética. No modelo de edema de pata induzido pela carragenina (Cg), houve um aumento significativo (p < 0,05) no edema da pata, em relação à pata cont role, na 1ª, 2ª, 4ª e 6ª h em camundongos machos na linhagem balb c. Os tratamentos com o tirosol e o derivado (1) na dose de 100 mg/kg reduziram o edema significativamente na 6ª h após a injeção de Cg. Entretanto, o tratamento com o derivado (2) na dose de 100 mg/kg reduziu significativamente o edema nas 4ª e 6ª h. Ao final do experimento, após a 6ª h, o tecido plantar foi coletado para avaliar a atividade enzimática da mieloperoxidase (MPO) e a oncentração de óxido nítrico (NO). O derivado (2), na dose de 100 mg/kg, reduziu significativamente a atividade da MPO além de produzir um aumento expressivo na concentração de N O. Os compostos foram testados também no ensaio de quimiotaxia in vitro utilizando o agente quimiotático fMLP (formil-metionil-leucil-fenilanina). O tirosol mostrou uma inibição significativa na migração celular, nas concentrações de 30, 60 e 90 ?g/mL. Em relação ao derivado (1), foi possível obse rvar uma inibição significativa da migração, nas concent rações de 10, 30 e 60 ?g/mL. Por outro lado o derivado (2) revelou uma inibição significat iva em todas as concentrações testadas. Após os compostos serem submetidos ao ensaio de cit otoxicidade in vitro pelo MTT (brometo de 3 [4,5-dimetiltiazol-2-il] -2,5-difenil-2H-tetrazólio), os dados indicaram que o tirosol, e os derivados (1) e (2) não alteraram siginificativamen te a viabilidade celular, nas concentrações testadas. Por fim, para avaliar a atividade antioxidante, a concentração inibitória média pelo método de DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazila) foi determinada, sendo de 377 ± 1,41 ?g/mL para o tirosol, 1353 ± 4,24 ?g/mL para o derivado (1) e 1515 ± 2,82 ?g/mL para o derivado (2). Portanto, os dados mostraram que as modificaçõ es moleculares realizadas no tirosol mantiveram as propriedades anti-inflamatórias dessa molécula, no caso do derivado (1), ou ainda promoveram uma potencialização do efeito na m igração celular no caso do derivado (2), em relação aos métodos utilizados para avaliação

ABSTRACT: Molecular modifications are promising between the various forms used to enter new therapeutic drugs. Thus, this research involved molecular modifications of tyrosol, producing new derivatives salicylates, with the aim of evaluating their anti-inflammatory effects in experimental models of acute response in mice, as well as experimental models in vitro to observe the migration of neutrophils and antioxidant activity. The first modification consisted in the introduction of one adjacent carboxylic acid group on one of the phenolic groups, creating derivative (1) salicylate. Another modification consisted by acetylating of another phenolic group, thereby producing the derivative (2), acetylsalicylate. Moreover, it was possible to obtain intermediates of the reaction isolated and purified in good yields, in the most reactions, and present their chemical structures identified and proven by Nuclear magnetic resonance of proton and carbon, in the limiting phase synthesis. In the paw edema model induced by carrageenan (Cg), there was a significant increase (p <0.05) in the edema of the paw compared to the control paw, in the 1st, 2nd, 4th and 6th hour in balb c male mice. Treatments with tyrosol and derivative (1) at a dose of 100 mg/kg reduced the edema significantly at the 6th hour after Cg injection. However, treatment with derivative (2) at dose of 100 mg/kg, significantly reduced the edema in the 4th and 6th hour. At the end of the experiment, after the 6th hour, the plant tissue was collected to assess the enzymatic activity of myeloperoxidase (MPO) and nitric oxide (NO) concentration. The derivative (2), at dose of 100 mg/kg, significantly reduced MPO activity and produces a significant increase in NO concentration. Tyrosol and the new salicylates derivatives were also tested in vitro chemotaxis assay, using the chemotactic agent fMLP (formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine). Tyrosol showed a significant inhibition of cell migration, at concentrations of 30, 60 and 90 ?g/mL. Regarding the derivative (1), it was possible to observe a significant inhibition of migration at concentrations of 10, 30 and 60 ?g/mL. On the other hand, the derivative (2) showed significant inhibition at all concentrations tested. After the compunds has submitted in the in vitro cytotoxicity assay by MTT (3 [4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium chloride), the data indicated that the tyrosol and the derivatives (1) and (2) not significantly altered the cell viability at the tested concentrations. In order, to evaluate the antioxidant activity, the median inhibitory concentration for the DPPH assay (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) was determined, with 377 ± 1.41 ?g/mL for tyrosol, 1353 ± 4.24 ?g/mL for derivative (1) and 1515 ± 2.82 ?g/mL for the derivative (2). Therefore, the data indicated that the molecular modifications made in the tyrosol, has maintained the anti-inflammatory properties of this molecule in the case of derivative (1) or has promoted a potentiation effect on cell migration in the case of derivative (2) in relation to the evaluated techniques