Avaliação de diferentes métodos para detecção de sinergismo antimicrobiano em amostras de Klebsiella pneumoniae produtora de KPC-2

Abstract

Resumo: O aumento gradativo da resistência bacteriana e a falta de novos antimicrobianos em desenvolvimento representam um grande desafio à terapêutica de infecções causadas por bactérias multirresistentes. Neste contexto a associação de antibacterianos tem sido uma alternativa na busca de melhores resultados. A avaliação da ação sinérgica in vitro vem sendo avaliada por diferentes metodologias que, de modo geral, são complexas e laboriosas. O estudo teve como objetivo propor metodologias de fácil execução para detecção de sinergismo antimicrobiano e comparar diferentes métodos já estabelecidos na literatura, testando meropenem, polimixina B e gentamicina em isolados de Klebsiella pneumoniae positivas e negativas para o gene blaKPC-2. Oito isolados de K. pneumoniae foram testados para os métodos padrões de sinergismo: time-kill curve (TKC) e checkerboard (CB) e para as metodologias propostas de duplo disco (DD) e time-kill curve modificado (TKCM) Também foram utilizadas as metodologia de E-test® cruzamento em 90° (C90º), E-test® razão fixa (RF) e disco aproximação (DA) já descritas na literatura. Não houve uma relação direta entre os resultados obtidos nos métodos padrões de TKC e CB. Nenhum dos métodos de E-test mostrou boa correlação com TCK ou com CB, bem como o método de DA. Em relação aos métodos propostos neste estudo, o de melhor correlação tanto com o método TKC e CB, foi o de TKCM com 66,7% e 42,9% de concordância e 90% e 83% de sensibilidade respectivamente. Considerando os dados observados neste estudo, nas associações antimicrobianas aqui testadas (i.e. PB+MR, MR+GN e PB+GN), concluímos que as metodologias baseadas em E-test tanto RF quanto C 90°, bem como as metodologias de disco difusão foram ineficazes na detecção do sinergismo. Além disso, verificou-se que o método de TKCM mostrou ser sensível e rápido na detecção do sinergismo podendo ser facilmente implantado em um laboratório de rotina

Abstract: The increase in drug-resistant bacteria and the low development of new antibiotics represent a big challenge of treatment of multiresistant bacterial infections. In this context the antibacterial association has been an alternative in the better search results. The in vitro evaluation of synergistic action has been evaluated by different methodologies that are complex and laborious. The objective of this study was propose easily antimicrobial synergism methods and compare it with different detection methods already established in the literature, using meropenem, gentamicin and polymyxin B against positive and negative isolates of blaKPC-2 Klebsiella pneumoniae. Eight K. pneumonia strains were tested to the standard synergy methods: time-kill curve (TKC) and checkerboard (CB) and compared to the proposed methodologies double disc (DD) and time-kill curve modified (TKCM) and to the also described in literature E- Test® Cross 90º (C90º), E-Test® fixed ratio (FR) and disk approximation (DA) methods. There was not a direct relation between the results obtained by standard methods CB and TKC. None of the E-test e disc methods showed good correlation with TKC or CB. In relation to the proposed methods in this study, the best who correlation with CB and TKC method, was the TKCM with 66.7% and 42.9% agreement and 90% and 83% sensitivity respectively. Considering the data observed in this study, the antimicrobial associations tested (PB +MR, PB +GN and GN+MR), we conclude that the methodologies based on E-test® and disk diffusion are ineffective in the detection of synergism. Furthermore, it was found that the TKCM method proved to be sensitive and rapid of synergism detection and can be easily implemented in a routine laboratory