Neoliberalismo em cena : Tempo, trabalho e violência no cinema brasileiro (2011-2020)

Abstract

Resumo: Assim como nos seres humanos, os cães também envelhecem e a compreensão do processo de envelhecimento é um objetivo comum da medicina humana e veterinária, uma vez que isso pode levar a intervenções direcionadas para as diversas doenças causadas pela idade. A melhoria das fisiopatologias e, das comorbidades associadas ao envelhecimento de certa forma, pode melhorar a qualidade de vida e, o bem-estar da população canina idosa. O envelhecimento está relacionado a diversas alterações no perfil bioquímico sérico, no hemograma completo e, na expressão de genes que afetam diferentes funções do organismo. A análise de expressão gênica é uma poderosa ferramenta, sensível e rápida que pode ser utilizada na identificação de genes expressos como potenciais biomarcadores do envelhecimento, podendo ser um preditor do envelhecimento biológico e, possivelmente, de patologias relacionadas à idade no cão. Dessa forma, é importante padronizar a análise de expressão gênica, em tecidos biológicos menos invasivo ao animal, como por exemplo, o sangue total. Em cães, não foi encontrado até o momento, nenhum estudo investigando o impacto de procedimentos pré-analíticos focados na coleta e no armazenamento do sangue e, de determinação do gene endógeno (também conhecido como gene referência) sobre a análise de expressão gênica no sangue total. Nesse sentido, nossos objetivos foram testar um método de coleta e armazenamento do sangue total, bem como determinar o gene endógeno para a análise de expressão gênica no sangue total de cães jovens e idosos e, avaliar se cães jovens e idosos apresentam diferenças na temperatura corporal, nos batimentos cardíacos, no hemograma completo, nos perfis bioquímicos séricos e, na expressão dos genes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase 1 (GPX1) avaliada no sangue total. Doze cães foram divididos em dois tratamentos: animais jovens (n?=?6; idade média = 3,9 anos), e animais idosos (n?=?6, idade média = 12 anos). Para a análise de hemograma completo e perfil bioquímico sérico, 2 mL de sangue foi coletado da veia jugular com seringa e transferido imediatamente para tubos com anticoagulante (1 mL) e com ativador de coágulo (1 mL). Para a análise de expressão gênica, 1 mL de sangue da veia jugular foi coletado com seringa e, transferido imediatamente para o tubo criogênico que foi congelado em nitrogênio líquido e, em seguida foi armazenado em freezer a - 80ºC. Para determinar o gene endógeno foi avaliada a especificidade e eficiência de amplificação dos genes, a variação na expressão dos genes endógenos e, a estabilidade dos genes foi avaliada por meio do teste de normalidade Shapiro-Wilk e pelo software RefFinder. Os dados de hemograma completo, do perfil bioquímico sérico e da expressão dos genes SOD, CAT e GPX1, foram avaliados por meio da ANOVA one-way e, as médias foram comparadas pelo teste t de Student (p < 0,05). A análise de correlação de Pearson foi realizada para avaliar a relação entre a expressão dos genes alvos (p < 0,05). O rendimento de RNA total do sangue de cães variou de 245,3 a 938,6 ng/µL, e apresentou alta qualidade e integridade. As curvas de melting dos genes endógenos (?- actina e gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH)), e dos genes alvos SOD, CAT e GPX1 demonstraram especificidade de amplificação. A eficiência de amplificação do gene ?-actina foi de 96% e do GAPDH 94%. A eficiência de amplificação dos genes alvos SOD, CAT e GPX1 foi de 108%, 99% e 102%, respectivamente. Não houve variação significativa, na expressão dos genes endógenos no sangue total de cães jovens e idosos. A expressão do gene ?-actina seguiu distribuição normal e teve maior estabilidade na expressão no sangue de cães de diferentes idades. Não houve efeito significativo da faixa etária sobre o peso corporal, a temperatura retal e, a frequência cardíaca. Cães idosos apresentaram menor valor de expressão dos genes SOD, CAT e GPX1. Houve correlação positiva entre a expressão do gene SOD e CAT (0,89), SOD e GPX1 (0,91), e entre a CAT e a GPX1 (0,74) no sangue total dos cães. Os cães idosos apresentaram menor concentração de hemoglobina, maior porcentagem de eosinófilo, maior quantidade de plaquetas, maior quantidade de neutrófilos segmentados e, maior atividade da enzima fosfatase alcalina. Os resultados sugerem, que o método pré-analítico e o gene endógeno escolhido, podem ser aplicados com eficiência na condução da análise de expressão gênica no sangue total de cães em diferentes idades. Além disso, os resultados demonstram existir alterações bioquímicas e moleculares relevantes em cães idosos,possivelmente como consequência do envelhecimento, uma vez que a qualidade de vida dos cães avaliados era boa e semelhante.

Abstract: Just like humans, dogs also age, and understanding the aging process is a common goal of human and veterinary medicine, as this can lead to targeted interventions for various diseases caused by aging. Improving pathophysiology and comorbidities associated with aging can, in a certain way, improve the quality of life and well-being of the elderly canine population. Aging is related to several changes in the serum biochemical profile, in the complete blood count and in the expression of numerous genes that affect different functions of the organism. Gene expression analysis is a powerful, sensitive and rapid analysis that can be used to identify genes expressed as potential biomarkers of aging, and can be a predictor of biological aging and, possibly, age-related pathologies in dogs. It is therefore important to standardize gene expression analysis in biological tissues that are less invasive to the animal, such as whole blood. In dogs, to date, no study has been found investigating the impact of pre-analytical procedures (focused on blood collection and storage) and endogenous gene determination on gene expression analysis in whole blood. In this sense, this study our objectives were to test a method of collecting and storing whole blood, as well as determining the endogenous gene (also known as reference gene) for the analysis of gene expression in the whole blood of young and old dogs and, to evaluate whether young and old dogs present differences in temperature body, heart rate, complete blood count, serum biochemical profiles and expression of genes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase 1 (GPX1) evaluated in whole blood. Twelve dogs were divided into two treatments: young animals (n?=?6; average age = 3.9 years), and elderly animals (n?=?6, average age = 12 years). To analyze the complete blood count and serum biochemical profile, 2 mL of blood was collected from the jugular vein with a syringe and immediately transferred to tubes with anticoagulant (1 mL) and clot activator (1 mL). For gene expression analysis, 1 mL of blood from the jugular vein was collected with a syringe and immediately transferred to cryogenic tube, frozen in liquid nitrogen and then stored in a freezer at -80ºC. To determine the endogenous genes, the specificity and amplification efficiency of the genes and variation in the expression of the endogenous genes was evaluated. Stability of the genes was evaluated using the Shapiro-Wilk normality test and by RefFinder software. The complete blood count data, biochemical profile and expression of the SOD, CAT and GPX1 genes were evaluated using one-way ANOVA and the means were compared using the Student's t-test (p < 0.05). Pearson correlation analysis was performed to evaluate the relationship between the expression of target genes (p < 0.05). The yield of total RNA from dog blood ranged from 245.3 to 938.6 ng/µL, and was of high quality and integrity. The melt curves of endogenous genes (?-actin and glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)), and target genes SOD, CAT and GPX1 demonstrated amplification specificity. The amplification efficiency of the ?-actin gene was 96% and that of GAPDH 94%. The amplification efficiency of the target genes SOD, CAT and GPX1 was 108%, 99% and 102%, respectively. There was no significant variation in the expression of endogenous genes in whole blood from young and old dogs. The expression of the ?-actin gene followed a normal distribution and had greater stability in expression in the blood of dogs of different ages. There was no significant effect of age group on body weight, rectal temperature and heart rate. Elderly dogs had lower expression values for the SOD, CAT and GPX1 genes. There was a positive correlation between the expression of the SOD and CAT gene (0.89), SOD and GPX1 (0.91), and between CAT and GPX1 (0.74) in the dogs' whole blood. Elderly dogs had a lower hemoglobin concentration, a higher percentage of eosinophils, a higher number of platelets, greater number of segmented neutrophils and a higher activity of the alkaline phosphatase enzyme. The results suggest that the pre-analytical method and the chosen endogenous gene can be efficiently applied to conduct gene expression analysis in whole blood from dogs under different ages. Furthermore, results demonstrate that there are relevant biochemical and molecular changes in elderly dogs, possibly because of aging, since the quality of life of the evaluated dogs was good and similar.