Padronização de metodologia molecular para a detecção de arbovírus em vetores do gênero Aedes no município de Maringá

Abstract

Resumo: No Brasil, arbovírus como dengue, Zika e Chikungunya causam graves problemas de saúde pública e compartilham os mesmos vetores urbanos: Aedes aegypti e Aedes albopictus. Apesar dos esforços para desenvolver medicamentos antivirais, ainda não existem tratamentos específicos, e o controle desses vírus depende principalmente do manejo dos mosquitos. Neste sentido, o desenvolvimento de métodos moleculares para este fim vem recebendo destaque como uma importante ferramenta para a vigilância virológica em vetores e análise de risco epidêmico. Desta maneira, este estudo teve como objetivo padronizar uma metodologia molecular para a detecção de arbovírus em vetores do gênero Aedes no município de Maringá. As áreas para coleta de amostras como ovos, larvas, pupas e insetos adultos de Aedes spp. foram selecionadas com base na distribuição dos casos de dengue no município de Maringá. Durante o período de fevereiro de 2023 a agosto de 2024 foram obtidos 1.022 insetos adultos do gênero Aedes, sendo 98,9% (n=1.011) da espécie A. aegypti e 1,1% (n=11) de A. albopictus. Estes foram divididos em um total de 79 pools de acordo com a espécie e o local de coleta, variando de 1 a 40 insetos cada pool. Após a extração do RNA total, as amostras foram submetidas em duas abordagens distintas de RT-qPCR, utilizando um kit comercial e ensaio in-house. Dos 79 pools estudados, um pool formado pelos mosquitos desenvolvidos de ovos apresentou-se positivo para DENV-2 com Ct de 31,382. Entretanto, o vírus foi detectado apenas utilizando o kit comercial, não sendo possível detectar na técnica in-house. Apesar da necessidade de uma melhor padronização da técnica in-house, esse resultado representa a possibilidade de uso dessa ferramenta para o mapeamento antecipado dos vírus no município antes do surgimento de casos em seres humanos.

Abstract: In Brazil, arboviruses such as dengue, Zika, and Chikungunya pose serious public health challenges and share the same urban vectors: Aedes aegypti and Aedes albopictus. Despite efforts to develop antiviral drugs, there are still no specific treatments, and controlling these viruses relies primarily on mosquito management. In this context, the development of molecular methods has emerged as an important tool for virological surveillance in vectors and for assessing epidemic risk. This study aimed to standardize a molecular methodology for detecting arboviruses in Aedes genus vectors in the municipality of Maringá. Sample collection areas for eggs, larvae, pupae, and adult Aedes spp. were selected based on the distribution of dengue cases in Maringá. From February 2023 to August 2024, 1.022 adult Aedes mosquitoes were obtained, 98,9% (n = 1.011) of which were A. aegypti and 1,1% (n = 11) were A. albopictus. These were divided into a total of 79 pools according to species and collection site, ranging from 1 to 40 insects per pool. After total RNA extraction, the samples were subjected to two RT-qPCR approaches: a commercial kit and an in-house assay. Of the 79 pools analyzed, one pool formed by mosquitoes reared from eggs tested positive for DENV-2, with a Cq value of 31,382. However, the virus was detected only using the commercial kit, as the in-house technique did not yield a positive result. Although further standardization of the in-house technique is needed, this result demonstrates the potential of using this tool for early mapping of viruses in the municipality before the onset of human cases.